Сыворотка сальмонеллезная поливалентная ABCDE. Используется сыворотка диагностическая сальмонеллезная адсорбированная для РА Сыворотки сальмонеллезные

Набор реагентов «Сыворотки диагностические сальмонеллезные адсорбированные О-поливалентные для реакции агглютинации" предназначен для идентификации с помощью реакции агглютинации (РА) на предметном стекле бактерий рода Salmonella, выделенных из биологического материала человека (моча, испражнения, промывные воды желудка, рвотные массы).

Описано более 2400 патогенных сероваров сальмонелл, вызывающих у человека острые гастроэнтериты, тифоподобные и септикопиемические формы заболевания, объединенных под названием сальмонеллез. Основными возбудителями сальмонеллеза являются Salmonella сероваров enteritidis, typhi murium, cholerae-suis, haifa и т.д.

Набор реагентов «Сыворотки диагностические сальмонеллезные адсорбированные О-поливалентные для реакции агглютинации" предназначен для идентификации таких бактерий с целью назначения правильного лечения больного.

Набор выпускается в 4 вариантах комплектации:

Комплект №1 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп (А, В, С, D , E ):

Комплект №1/1 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп, сухая;

Комплект №1/2 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп, жидкая;

Комплект №2 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп:

Комплект №2/1 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп, сухая;

Комплект №2/2 - Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп, жидкая.

Каждый вариант комплектации в 2 исполнениях.

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

		Исполнение 1	Исполнение 2
Комплект №1 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп (А,В,С,D,E)
Комплект №1/1	сухая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана, содержащая О-агглютинины против антигенов 1;2;3,4;5;6.1;6.2;7;8;9;10;12,Vi; инактивированная; аморфная масса белого или кремового цвета	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)
Комплект №1/2	жидкая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана, содержащая О-агглютинины против антигенов 1;2;3,4;5;6.1;6.2;7;8;9;10;12,Vi; инактивированная; бесцветная или розовато-желтого цвета жидкость	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)
Комплект №2 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп
Комплект №2/1	сухая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана следующих групп (F; G; H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, V, X,Y, Z,52,53,54" 55,57, 58, 59, 60, 61), содержащая О-агглютинины против антигенов 11;13, 22; 14, 24; 23; 24; 25; 16; 17; 18; 21;28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61); инактивированная; аморфная масса белого или кремового цвета	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)
Комплект №2/2	жидкая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана следующих групп (F; G; H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, V, X,Y, Z,52,53,54" 55,57, 58, 59, 60, 61), содержащая О-агглютинины против антигенов 11;13, 22; 14, 24; 23; 24; 25; 16; 17; 18; 21;28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61); инактивированная; бесцветная или розовато-желтого цвета жидкость	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению сокращенная схема антигенной структуры бактерий сальмонеллезной группы.

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовые варианты комплектов набора рассчитаны на исследование 200 (исполнение 1) или 40 образцов (исполнение 2).

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Адсорбированные сыворотки содержат антитела, которые агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гомологичные О-антигены, и не агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гетерологичные О-антигены.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Исследуется культура, выделенная при бактериологических исследованиях из биологического материала (моча, испражнения, промывные воды желудка, рвотные массы) и выращенная в пробирках на скошенном питательном агаре в течение 18-20 ч при температуре 37 0 С.

Допускается хранение выделенной культуры на питательном агаре при температуре +2 -+8 в течение 2 суток.

Сбор, хранение и подготовка биологического материала человека должны производиться в соответствии с ГОСТ Р 53079.4-2008 «Обеспечение качества клинических лабораторных исследований», МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды».

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Специфическая активность:

Аналитическая чувствительность: определяется с гомологичными музейными тест-штаммами Salmonella и составляет 100%

Аналитическая специфичность: определяется с гетерологичными музейными тест-штаммами Salmonella и составляет 100%

Воспроизводимость результатов составляет 100%.

Диагностическая чувствительность (с доверительной вероятностью 95%) составила:

Диагностическая специфичность (с доверительной вероятностью 95%) составила:

Музейные тест-штаммы Salmonella - 98,07%-100%;

Культуры Salmonella, выделенные из клинического материала пациентов - 98,25%-100%.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Меры предосторожности при работе с набором - соблюдение правил "Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений" (Утв. Минздравом СССР 17 января 1991 г.), ГОСТ Р 52905-2007 (ИСО 15190:2003).

Набор реагентов, в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» относится к классу Б (эпидемиологически опасные отходы).

Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 "Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами" и МУ 287-113 "Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения".

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Оборудование и материалы (для "ручной" постановки)

Cекундомер;

Холодильная камера с температурным режимом 2-8 0 С;

Пипетки полуавтоматические с рабочими диапазонами: 5-50 мкл, 20-200 мкл;

Одноразовые наконечники к указанным пипеткам;

Контейнеры для жидких и твердых отходов;

Резиновые или латексные перчатки, средства дезинфекции;

Петля бактериологическая;

Стекла предметные;

Лупа с увеличением (2х);

0,9 % раствора хлористого натрия;

Термостат суховоздушный, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С;

70 %-ный раствор спирта этилового и 6 %-ный раствор перекиси водорода (дез.растворы) или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Постановка РА на стекле

Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка

Сухую сыворотку растворяют в 2 мл 0,9% водного раствора хлористого натрия

На предметное стекло наносят одну каплю (около 50 мкл) сыворотки и одну каплю 0,9% водного раствора хлористого натрия. Идентифицируемую культуру, выращенную в пробирках на скошенном питательном агаре в течение 18-20 ч при температуре 37 о С, снимают с верхней части агара петлей, наносят на предметное стекло вблизи капли 0,9% водного раствора хлористого натрия и эмульгируют (контроль на отсутствие спонтанной агглютинации). При отсутствии спонтанной агглютинации манипуляцию повторяют в капле О - сыворотки, формируя равномерную непрозрачную суспензию. Учет результатов проводят в течение 1-2 минут, мягко покачивая стекло. Гомогенная суспензия свидетельствует об отрицательном результате.
При наличии агглютининов к исследуемому штамму в капле сыворотки в течение 1 -2 мин появляется хлопьевидный агглютинат.

Учет результат РА производят визуально при помощи лупы с увеличением(2х) по четырехкремстной системе

Результаты РА учитываются и оцениваются следующим образом:

Отчетливый агглютинат при полном просветлении жидкостив капле (100%).

Отчетливый аггютинат на фоне мутноватой жидкости (75%)

Незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости (50%)

Следы агглютината, жидкость в капле мутная (25%)

(-) - отрицательный результат, гомогенно мутная жидкость в капле (0%).

РА с диагностической сывороткой учитывается только при отрицательном результате контроля спонтанной агглютинации.

Исследуемую культуру относят к соответствующей О-группе, если на стекле получена РА с поливалентной сывороткой этой группы не ниже чем на (+++).

СРОК ГОДНОСТИ

Комплект №1/1, №1/2. Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка, сухая - 3 года со дня приемки ОБТК предприятия-изготовителя.

Комплект №2/1, №2/2. Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка, жидкая- 1 год со дня приемки ОБТК предприятия-изготовителя.

ХРАНЕНИЕ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ

Хранение

В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 о С до 8 о С. Замораживание не допускается.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 о С в течение 1 мес.

Транспортирование

При температуре от 2 до 8 о С транспортом всех видов в крытых транспортных средствах в соответствии с правилами перевозок, действующими на транспорте данного вида. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 о С до 25 о С в течение 14 сут.

УСЛОВИЯ ОТПУСКА

Для учреждений здравоохранения.

Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (Н)

Определение серовара Диагн. Ат получают в 2 этапа. На 1-м этапе берут S.paratyphi (чистую культуру микроба) . А О-1,2,12 на обработку формалином. Происходит разрушение О-Аг, второй этап гипериммунизация кролика оставшимся Аг и вырабатывается Ат. . Полученная сыворотка используется для сероидентификации сальмонел в РА на 3 этапе бакт. анализа.

Сухая агглютинирующая адсорбированная поливалентная сыворотка к шигеллам.

Сибиреязвенная сыворотка лошадиная, меченная ФИТЦ

АТ,диагностический;Получают гипериммунизацией лошадей возбудителем сибирской язвы, применяют в РИФ (прямой метод)

Кроличий античеловеческий глобулин, меченный ФИТЦ

АТ,диагностический. Получают гипериммунизацией кролика гамма-глобулинами человека, применяют в РИФ (непрямой метод)

Гриппозная диагностическая сыворотка

Диагн. Ат,которая используется в РТГА или РСК для идентификации вируса гриппа опр.серотипа, при вирусологическом методе диагностики. При образовании пуговки серотип сыворотки соответствует серотипу вируса гриппа. При образовании зонтика НЕ соответствует.

Диагностикумы, антигены

Туляремийный диагностикум

Бруцеллезный диагностикум

Препарат подкрашен синькой или негциан-виолетом. Используется для РА на стекле в реакции Хаддилсона для серодиагностики бруцеллеза. Ели аглютинация происходит мгновенно, то человек болен бруцеллезом (титр АТ 1:200). Если раекция произошла через 30 сек. И позже,то надо повторить,титр 1:100, если агл-и нет, то человек здоров!

Парагриппозный диагностикум

Эритроцитарный туберкулезный диагностикум для РНГА.

Гонококковый антиген

Представляет собой диагностический препарат полученный из гонококков Neisseria gonorrhaea, путем инактивирования нагревание. Используется для серодиагностики гонореи в РСК.

Кардиолипиновый антиген

Ультраозвученный трепонемный антиген

Кардиолипиновый антиген для реакции микропреципитации (микрореакции)

Бактериофаги диагностические

Холерный монофаг Эль-Тор

АГ диагностический. Представляет собой фаголизат суточной бульонной культуры возбудит. Холеры биовара «Эль-Тор».

Фаголизат получается путем добавления нескольких капель бактериофага опред.типа в суточную бульонную культуру возбудителей холеры. После инкубации в следствии размножения б/ф, возбудитель холеры разрушается,а фаговые частицы накапливаются. Всё это фильтруется сквозь бакт.фильтры. Полученный б/ф титруют по методу Грациа и разливают в ампулы. Монофаг «Эль-Тор» используется для фаготипирования холеры при бактериологич.анализе методом Отто.

Аллергены

Тулярин

Бруцеллин

Туберкулин очищенный (PPD)

АГ,диагностическийю Получают: выращивают микобактерии, выделяют белки, применяют для внутрикожной аллергической пробы Манту; учитывают через 48-72 часа, измеряют диаметр папулы в мм (допустимые 5-22 мм), больше реакция положительная!

Стафилококковый анатоксин

Лечебнай препарат, получают из экзотоксинов бактериальной клетки, по правилу Рамона (3-х «4»). Для этого токсины бактерий культивируют в исслед. пит. Среде и пропускают сквозь бактериальный фильтр. Вводят обычно под кожу или внутримышечно. Приобретённый, активный, искусственный, антитоксический иммунитет. Применяется для хронических форм инфекий!

Дифтерийный анатоксин

Лечебно-профилактический препарат, полученный из экзотоксинов дифтерии по правилу Рамона. Используют для лечения легких форм дифтерии и для профилактики лиц, находящихся в контакте с больными дифтерией.

Входит в состав вакцин АКДС, АДС. Приобретённый, активный, искусственный, антитоксический, напряженный иммунитет.

Столбнячный анатоксин

Профилактический препарат, получаемый из экзотоксина столбняка по правилу Рамона. Используется в составе АКДС, АДС, а также для профилактики столбняка людям с порезами (ножевой) гвоздевой, при ожогах, обморожении, а так же роженицам и их детям,в случае родов не в стационаре. Приобретённый, активный, искусственный, антитоксический, ненапряженный иммунитет.

Холероген-анатоксин

(+ О1-антиген)

Комбинированная вакцина, содержит извлеченный химическим путем О1-АГ возбудитель холеры и инактивируется температурой, а так же холероген-анатоксин получают по принципу Рамона, из холерного экзотоксина. Применяется по эпид. Показаниям у взрослух и детей после 7 лет. Иммунитет приобретенный, искуственный,активный.

tyle="fM? sz?E? ?? font-family:"Times New Roman","serif""> , штамм Ту-2, из которой химическим путем выделили Аг-Vi и инактивировали, т.о. вакцина содержит 2 поверхностных исходных Аг. Применяется по эпид. показаниям. С 2-х летнего возраста: Приобретённый, активный, искусственный, антимикробный, напряженный иммунитет. RV каждые 5 лет.

Сибиреязвенная вакцина

Вакцина БЦЖ.

В 1921 году Аг. Представляет собой профилактический препарат, содерж. Живые ослабленные туберкулезные палочки бычьего типа (Mycobacterium bocsis). Ослабление путем культивирования в течении 13 лет, 230 пассажей на картофельно-глицериновую среду солей жирных кислот.

При получении вакцины легли 2 принципа: 1) Дженер использовал возбудителя родственного патогенному, но не опасного для человека. 2) Пастер (аттенуация) –снижение вирулентности. Вакцина является обязательной, вводится всем детям в род.доме на 4-6 день жизни, внутрикожно в область плеча! RV через 7 лет, или в 14, при отрицательной пробе Манту!!! Приобретённый, активный, искусственный, антимикробный, напряженный иммунитет.

Коколюшная моновакцина

Коревая вакцина

Гриппозные вакцины

Инфлювак-субъединичная вакцина, Аг, профилактический препарат. Получен путем выращивания вируса гриппа и выделение отдельных компанентов из бактерии. Применяется для профилактики гриппа по эпид.показаниям! Приобретённый, активный, искусственный, антивирусный, напряженный иммунитет.

Чумная вакцина

Профил.вакцина, содержит живые авирулентные штаммы чумной бактерии, выделяют из трупа погибшего человека (мужчины). Исп.по эпид.показаниям в очагах чумы, лицам выезжающим в эпид.территории, мед.персоналу работающем в очагах. Вводят подкожно в область плеча, RV ежегодно. Приобретённый, активный, искусственный, антимикробный, ненапряженный иммунитет.

Антирабическая вакцина

культурально-клеточная. Лечебно-профилактическая вакцина содержит вирус бешенства, выращенная в культуре диплоидных клеток, кл.легких человека или фибробластах новорожденных хомечков и инактивируют формалином. Вводят по 2-м схемам: 1) Люди в группе риска 1V из 7 дней и из 28 дней. 2) экстренная профилактика по эпид.показаниям (после укуса животного)

Бруцеллезная вакцина

Вакцина против гепатита В (Engerix-B)

Аг, профилактическая, ген, который осущ.синтез оболочки вируса, присоединяется к геному дрожжевой клетки. Применяется детям в первые 12 часов жизни. Сроки вакцинации: 0-1-6 мес, сроки риска: 0-1-2-12 мес.

Энжерикс В-генно-инженерная вакцина. Иммунитет: Приобретённый, активный, искусственный, антивирусный, напряженный.

Гонококковая вакцина

Дизентериная вакцина

Бруцеллезная вакцина

Стафилококковая вакцина

Лечебно-профилактические сыворотки, пробиотики, бактериофаги

Интерферон лейкоцитарный

Интерфероны- низкомолекулярные белки глобулиновой природы, синтезируется клетками и ответ на проникновение вируса, оказывают противовирусное, антипролиферативное, иммуномодулирующее действие. Лечебно-профилактический. Получают из лейкоцитов, для лечения и профилактики вирусных инфекций.

Бифидумбактерин

Лактобактерин

Колибактерин

Бификол

В живом состоянии! Для лечения и профилактики дизбиоза. Пробиотики- бактерии из нормальной кишечной флоры.

Монокомпонентные: бифидумбактерин, лактобактерин

Поликомпонентные: бификол- АГ, выращивают в одном реакторе бифибобактерии, в другом колибактерии; смешивают, затем замораживают, высушивают.

Дизентирийный бактериофаг

Брюшнотифозный бактериофаг

Брюшнотифозный (Эль-тор) Получают из фильтрата фаголизата холерных вибрионов. Могут быть как в житком виде, так и в таблетках для лечения.

Монорецепторная сыворотка агглютинирующая сальмонеллезная (О)

Пренадлежность к группе диагност. Ат, кот. получают в 3 этапа: на 1-ом выбираем сальмонелу (например S.typhimurium c Аг структурой О-1,4,5,12; Mi 1,2) нагревают на водяной бане для разрушения жгутиков Н-Аг,ост. Только О-Аг 1,4,5,12. На втором этапе проводят гипериммунизацию кроликов оставшимся О-Аг сальмонелл, у кролика образуются О-1,4,5,12 Ат. Это поливалентная сыворотка. На 3-ем этапе проводим истощение сыворотки по Кастеллани. Для этого и получают сыворотку добавляют предварительно нагретых на вод. Бане из той же сер.группы например S.hudelberg o-4,5,12 Аг, произойдет связь Аг и оставшегося О-1 Ат. Полученная сыворотка используется для сероидентификации сальмонел в РА на 3 этапе бакт. анализа.

Получают так же, как и другие диагностические сыворотки. Применяют для серотипирования сальмонелл в реакции агглютинации.

Сальмонеллезные О- и Н-монодиагностикумы. Представляют собой взвеси сальмонелл, убитых нагреванием (О-диагностику-мы) или обработкой формалином (Н-диагностикумы). Применяют для серодиагностики брюшного тифа в реакции Видаля.

Типовые сальмонеллезные бактериофаги. Применяют для фа-готипирования сальмонелл.

Брюшнотифозная моновакцинд и брюшнотифозная спиртовая вакцина, обогащенная Vi-антигеном. Применяют для специфической активной профилактики брюшного тифа.

Поливалентный брюшнотифозный бактериофаг. Выпускается в виде таблеток с кислотоустойчивым покрытием. Применяют для экстренной профилактики брюшного тифа.

Коли-бактерин. Содержит лиофильно высушенные живые клетки E.coli штамма М17, обладающего выраженными антагонистическими свойствами в отношении ряда патогенных кишечных бактерий. Применяют для нормализации кишечной микрофлоры при дисбактериозе и лечении дизентерии, главным образом у детей.

Бифидумбактерин. Содержит лиофильно высушенную взвесь живых клеток B.bifidum. Применяют для лечения хронических кишечных инфекций невыясненной этиологии у детей и дизентерии.

Бификол. Содержит смесь высушенных живых бактерий E.coli штамма М17 и B.bifidum. Показания к применению те же.

Лактобактерин. Содержит продукты жизнедеятельности лак-тобактерий. Выпускается в таблетированном виде. Применяют для лечения дисбактериозов у детей.

Антибиотики: сульфаниламиды, полусинтетические пени-циллины, цефалоспорины 2-4-го поколения, хлорамфеникол, тетрациклины, фторхинолоны, полимиксин.

Тема 13.3. ВОЗБУДИТЕЛИ ПИЩЕВЫХ

ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ, ИНТОКСИКАЦИЙ, ХОЛЕРЫ

И ДРУГИХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

План

А Программа

1. Биологические свойства возбудителей холеры, пищевых токсикоинфекций и интоксикаций. Их патоген-ность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.

2. Лабораторная диагностика.

3. Диагностические, профилактические и лечебные препараты.

Демонстрация

1. Мазки из чистых культур возбудителей пищевых интоксикаций кишечных инфекций: Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, Vibrio cholerae. Окраска по методу Грама.

2. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.

Задание студентам

1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей кишечных инфекций.

2. Бактериологическая диагностика холеры.

2.1. Указать материал для исследования.

2.2. Идентификация чистой культуры вибрионов, выделенных от больного:

1) изучить морфологические и тинкториальные свойства: микроскопировать мазок из чистой культуры, выделенной от больного;

2) изучить антигенные свойства: отметить результаты развернутой реакции агглютинации с диагностической 01-сывороткой;

3) изучить биохимические свойства: отметить результат гексаминового теста;

4) определить чувствительность выделенной культуры к диагностическим бактериофагам;

5) отметить способность к росту на среде с поли-миксином;

6) дать заключение.

3. Диагностика ботулизма:

1) указать материал для исследования;

2) проанализировать результаты РИГА для обнаружения ботулотоксина в сыворотке крови больного (реакция Бойдена). Дать заключение.

4. Ознакомиться с диагностическими и лечебно-профи
лактическими препаратами.

Методические указания

■ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Микробиологическая диагностика пищевых токсикоинфекций, вызванных Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp.

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: фекалии, рвотные массы, промывные воды желудка больного, остатки пищевых продуктов - возможные источники и факторы передачи инфекции.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Производят путем посева

Материала на дифференциально-диагностические и элективные среды (Эндо, висмут-сульфит агар и др.) для выделения чистой культуры сальмонелл и эшерихий, а также в конденсационную воду в пробирке со скошенным питательным агаром для выявления бактерий рода Proteus. После инкубации посевов при 37 °С в течение 20-24 ч отмечают цвет колоний на чашках с дифференциальной средой и наличие "ползучего" роста, характерного для Proteus spp., в пробирке со скошенным питательным агаром. Подозрительные колонии пересевают на скошенный питательный агар для получения чистых культур и одновременно ставят с ними ориентировочную реакцию агглютинации на стекле, используя смеси диагностических сывороток. На следующий день с чистой культурой ставят развернутую реакцию агглютинации с соответствующей монорецеп-торной сывороткой и делают посев на среды "пестрого" ряда. При выделении одного и того же серовара сальмонелл или эшерихий из организма больных людей и пищевого продукта делают окончательное заключение об этиологии пищевой ток-сикоинфекции - источнике заболевания. При наличии "ползучего" роста на скошенном питательном агаре из конденсационной воды петлей берут материал для приготовления препарата "висячая" капля с целью установления подвижности и для мазка, который окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. Затем выделяют чистую культуру, определяют биохимические и другие признаки и устанавливают вид: P.vulgaris, P.mirabilis, P.morganii и P.rettgeri.

Оценка роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии пищевых токсикоинфекций должна быть строго аргументирована: а) бактериологическим, серологическим, эпидемиологическим и клиническим исключением сальмонеллезов, дизентерии, холеры; б) выделением идентичных штаммов условно-патогенных бактерий из рвотных масс, промывных вод желудка, испражнений, продуктов.

■ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ПИЩЕВЫХ ИНТОКСИКАЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Микробиологическая диагностика стафилококковых пищевых интоксикаций

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: рвотные массы, промывные воды желудка, подозрительные пищевые продукты.

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:

Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Диагностика основана на обнаружении энтеротоксина в исследуемом материале. Энтеро-токсин Staphylococcus spp. экстрагируют изотоническим раство-

ром хлорида натрия, затем определяют его присутствие и серологическую специфичность реакцией преципитации в геле с иммунными антитоксическими сыворотками А, В, С. Техника постановки реакции описана выше (см. рис. 10.1.6). Используют также латекс-агглютинацию, ИФА, РИА и др.

Бактериологическое исследование. С целью выделения чистой культуры стафилококка исследуемый материал, который может содержать жизнеспособные бактерии, засевают в чашки с ЖСА. Полученные по схеме (см. тему 12.1) чистые культуры проверяют на способность продуцировать энтеротоксины. Для эпидемиологического анализа массовых стафилококковых интоксикаций проводят фаготипирование выделенных культур с помощью набора стафилококковых фагов.

Биопроба. Для обнаружения энтеротоксина можно использовать биопробу - скормить изучаемый материал котятам-сосункам, у которых стафилококковый энтеротоксин вызывает рвоту и понос через 30-60 мин после скармливания.

Похожая информация.

Препарат представляет собой лиофилизированные иммунные адсорбированные сыворотки крови кроликов или баранов. Адсорбированные сыворотки содержат антитела, которые агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гомологичные О- и Н-антигены, и не агглютинируют культуры сальмонелл, содержащие гетерологичные О- и Н-антигены.

Назначение: серологическая идентификация бактерий рода Salmonella в реакции агглютинации на предметном стекле.

1. Препарат после вскрытия ампулы растворить в 1 или 2 мл 0,9 % раствора натрия хлорида. Растворенные сыворотки могут храниться в пробирках, закрытых резиновыми пробками при температуре 7 градусов в течение 1 мес.

2. На предметное стекло нанести пипеткой каплю растворенной сыворотки, вблизи нее петлю культуры, выращенной в течение 18-24 ч на питательном скошенном агаре при температуре 37 градусов, растереть ее в сыворотке. Для определения О-антигена следует брать культуру с верхней части агара,а для определения Н-антигена-с нижней части агара.

3. Производится учет результатов:

++++ -отчетливый агглютинат при полном просветления жидкости

+++ -отчетливый агглютинат на фоне мутноватой жидкости

++ -незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости

+ -незначительное количество агглютината на фоне мутной жидкости

Гомогенная мутная жидкость

Положительной считается реакция агглютинации интенсивностью не менее, чем +++.

8. Дифференциация(РА с сальмонеллезным бактериофагом).

9. Выдача результатов.

10.05 -работа в серологии- провела РПГА(реакция Хеддельсона при бруцеллезе).

Подготовка посуды к серологическому исследованию.

Обработка планшет:1. Выдерживают в 1% растворе соляной кислоты не менее 1 ч.

2. Промывают в теплой мыльной воде, протирая каждую лунку тампоном с ватой.

3. Прополаскивают 20 раз в проточной воде.

4 .Заливают дист. водой и оставляют до утра.

5. Утром сливают воду с планшет.

6. Подсушивают при комнатной температуре.

7. Перед постановкой реакции каждую лунку протирают тампоном с ватой, смоченной в физиологическом растворе.

Обработка посадок на дозатор

1. Уложить насадки в стеклянную емкость и залить 3-6% раствором перекиси водорода.

2. Поместить емкость с насадками в термостат, нагретый до температуры 50 градусов и выдержать при данной температуре в течении 3 ч.

3. Переложить насадки в емкость с дистиллированной водой, закрыть крышкой и выдержать при комнатной температуре 5 мин.

4. Высушить насадки при температуре 50 градусов 15 мин.

Проверила рН физиологического раствора с помощью индикаторной полоски(в норме рН=7,2-7,4)

Пластинчатый метод (реакция агглютинации на стекле)

1. Надела маску и перчатки, реакцию ставлю на обычном, тщательно вымытом, обезжиренном стекле.

2. расчерчиваю стекло на квадраты, величиной 4х4 см каждый.

3. Сверху записываю номера испытуемой сыворотки

4 .В последующие квадраты разливаю микропипеткой испытуемую сыворотку в следующих дозах:0,04; 0,02; 0,01 мм, контроль сыворотки и антигена.

5. Сыворотку осторожно смешиваю с антигеном стеклянной палочкой, начиная с минимальной дозы.

6 .Стекло слегка подогреваю над пламенем горелки так, чтобы происходило равномерное нагревание всей поверхности стекла. В случае положительной реакции в первые же минуты в каплях сыворотки с антигеном появляются хлопья.

7 .Обработала стол дез.средством

8. Сняла маску и перчатки, вымыла руки.

Цифровой отчет

Подготовка сыворотки крови-6

Реакций Хедельсона и Райта-1

Учет иммунологических реакций-1

Выдача результатов-1

Выписка протоколов-1

Двенадцатый день практики.

Санитарно-бактериологическое исследование воды.

Цель: Отбор проб водопроводной воды и посев по ГОСТу методом мембранных результатов. Отбор проб пищевых продуктов. Отбор проб воздуха в боксе на бактериальную обсемененность. Учет и выдача результатов.

Метод мембранных фильтров.

Первый день исследования

В воронку смонтированного и простерилизованного фильтровального прибора Зейтца наливают отмеренный объем исследуемой воды. С помощью насоса создают вакуум в приемном сосуде (обычно воду фильтруют через фильтры № 2 и 3). По окончании фильтрации стерильным или обожженным в огне пинцетом снимают фильтр и накладывают его на среду Эндо в чашке Петри так, чтобы поверхность с осевшими на ней микробами была обращена вверх (на одну чашку можно помещать 3-4 мембранных фильтра). Посевы инкубируют в термостате при температуре 37° С 18-24 ч.

Второй день исследования

Чашки с посевами (фильтрами) вынимают из термостата. Отсутствие подозрительных колоний дает право дать отрицательный ответ. Учету подлежат все красные и розовые колонии с металлическим блеском или без него. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму (рис. 56).

Рис. 56. Определение коли-индекса воды методом мембранных фильтров

При наличии грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу. Положительная оксидазная проба дает право дать отрицательный ответ. При отрицательной оксидазной пробе производят посев на полужидкую среду с глюкозой и индикатором или на среду ГПС с бродильными трубками - для выявления ферментации углевода до кислоты и газа. При наличии кислоты и газа вычисляют коли-индекс. Например, на всех фильтрах, находящихся на среде Эндо, выросло 3 колонии, пропущено через фильтр было 300 мл воды.

Расчет. 300 мл - 3 колонии

х = 1; коли-индекс 1

Отбор пробы воды

Для отбора проб воды используют специально предназначенную для этих целей одноразовую посуду или емкости многократного применения, изготовленные из материалов, не влияющих на жизнедеятельность микроорганизмов. Емкости должны быть оснащены плотно закрывающимися (силиконовыми, резиновыми или из других материалов) пробками и защитным колпачком (из алюминиевой фольги, плотной бумаги). Многоразовая посуда, в том числе пробки, должны выдерживать стерилизацию сухим жаром или автокла-вированием.

Пробу отбирают в стерильные емкости с соблюдением правил стерильности. Емкость открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и края емкости не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду запрещается.

При исследовании воды из распределительных сетей отбор проб из крана производят после предварительной его стерилизации обжиганием и последующего спуска воды не менее 10 минут при полностью открытом кране. Если отбирают воду после обеззараживания химическими реагентами, то для нейтрализации остаточного количества дезинфектанта в емкость, предназначенную для отбора проб, до стерилизации вносят натрий серноватистокислый в виде кристаллов или концентрированного раствора из расчета 10 мг на 500 мл воды.

После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой и колпачком. Отобранную пробу маркируют и сопровождают актом отбора проб воды с указанием названием пробы, места забора, даты (год, месяц, число, час), цель исследования, куда направляется проба для исследования, подпись лица, взявшего пробу.

Сыворотка сальмонеллезная поливалентная ABCDE

И Н С Т Р У К Ц И Я

по применению набора реагентов

«Сыворотки диагностические сальмонеллезные

адсорбированные О-поливалентные

для реакции агглютинации»

Регистрационное удостоверение №РЗН 2017/5914 от 06 .07 .2017 г.

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор реагентов «Сыворотки диагностические сальмонеллезные адсорбированные О-поливалентные для реакции агглютинации» предназначен для идентификации с помощью реакции агглютинации (РА) на предметном стекле бактерий рода Salmonella, выделенных из биологического материала человека (моча, испражнения, промывные воды желудка, рвотные массы).

Набор реагентов «Сыворотки диагностические сальмонеллезные адсорбированные О-поливалентные для реакции агглютинации» предназначен для идентификации таких бактерий с целью назначения правильного лечения больного.

Набор выпускается в 4 вариантах комплектации:

Комплект №1 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп (А, В, С, D , E ):

Комплект №1/1 — Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп, сухая;

Комплект №1/2 — Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп, жидкая;

Комплект №2 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп:

Комплект №2/1 — Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп, сухая;

Комплект №2/2 — Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп, жидкая.

Каждый вариант комплектации в 2 исполнениях.

СОСТАВ И КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА

		Исполнение 1	Исполнение 2
Комплект №1 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка основных групп (А,В,С,D,E)
Комплект №1/1	сухая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана, содержащая О-агглютинины против антигенов 1;2;3,4;5;6.1;6.2;7;8;9;10;12,Vi; инактивированная; аморфная масса белого или кремового цвета	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)
Комплект №1/2	жидкая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана, содержащая О-агглютинины против антигенов 1;2;3,4;5;6.1;6.2;7;8;9;10;12,Vi; инактивированная; бесцветная или розовато-желтого цвета жидкость	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)
Комплект №2 Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка редких групп
Комплект №2/1	сухая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана следующих групп (F; G; H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, V, X,Y, Z,52,53,54′ 55,57, 58, 59, 60, 61), содержащая О-агглютинины против антигенов 11;13, 22; 14, 24; 23; 24; 25; 16; 17; 18; 21;28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61); инактивированная; аморфная масса белого или кремового цвета	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)
Комплект №2/2	жидкая иммунная адсорбированная сыворотка крови кролика или барана следующих групп (F; G; H, I, J, K, L, M, N, O, P, Q, R, S, T, U, W, V, X,Y, Z,52,53,54′ 55,57, 58, 59, 60, 61), содержащая О-агглютинины против антигенов 11;13, 22; 14, 24; 23; 24; 25; 16; 17; 18; 21;28; 30; 35; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 47; 48; 50; 52; 53; 54; 55; 57; 58; 59; 60; 61); инактивированная; бесцветная или розовато-желтого цвета жидкость	5 фл. (по 2,0 мл)	1 фл. (по 2,0 мл)

ОСНОВНЫЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Базовые варианты комплектов набора рассчитаны на исследование 200 (исполнение 1) или 40 образцов (исполнение 2).

ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Допускается хранение выделенной культуры на питательном агаре при температуре +2 -+8 в течение 2 суток.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Специфическая активность:

Аналитическая специфичность: определяется с гетерологичными музейными тест-штаммами Salmonella и составляет 100%

Воспроизводимость результатов составляет 100%.

Диагностическая чувствительность (с доверительной вероятностью 95%) составила:

Диагностическая специфичность (с доверительной вероятностью 95%) составила:

Музейные тест-штаммы Salmonella — 98,07%-100%;

Культуры Salmonella, выделенные из клинического материала пациентов — 98,25%-100%.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Меры предосторожности при работе с набором – соблюдение правил «Инструкции по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений» (Утв. Минздравом СССР 17 января 1991 г.), ГОСТ Р 52905–2007 (ИСО 15190:2003).

Утилизацию или уничтожение, дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ 287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Оборудование и материалы (для «ручной» постановки)

Cекундомер;

Холодильная камера с температурным режимом 2-8 0 С;

Пипетки полуавтоматические с рабочими диапазонами: 5-50 мкл, 20-200 мкл;

Одноразовые наконечники к указанным пипеткам;

Контейнеры для жидких и твердых отходов;

Резиновые или латексные перчатки, средства дезинфекции;

Петля бактериологическая;

Стекла предметные;

Лупа с увеличением (2х);

0,9 % раствора хлористого натрия;

Термостат суховоздушный, поддерживающий температуру (37 ± 1) °С;

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ

Постановка РА на стекле

Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка

Сухую сыворотку растворяют в 2 мл 0,9% водного раствора хлористого натрия

На предметное стекло наносят одну каплю (около 50 мкл) сыворотки и одну каплю 0,9% водного раствора хлористого натрия. Идентифицируемую культуру, выращенную в пробирках на скошенном питательном агаре в течение 18-20 ч при температуре 37 о С, снимают с верхней части агара петлей, наносят на предметное стекло вблизи капли 0,9% водного раствора хлористого натрия и эмульгируют (контроль на отсутствие спонтанной агглютинации). При отсутствии спонтанной агглютинации манипуляцию повторяют в капле О — сыворотки, формируя равномерную непрозрачную суспензию. Учет результатов проводят в течение 1-2 минут, мягко покачивая стекло. Гомогенная суспензия свидетельствует об отрицательном результате.
При наличии агглютининов к исследуемому штамму в капле сыворотки в течение 1 -2 мин появляется хлопьевидный агглютинат.

Учет результат РА производят визуально при помощи лупы с увеличением(2х) по четырехкремстной системе

Результаты РА учитываются и оцениваются следующим образом:

++++ – отчетливый агглютинат при полном просветлении жидкостив капле (100%).

+++ – отчетливый аггютинат на фоне мутноватой жидкости (75%)

++ – незначительный агглютинат на фоне мутной жидкости (50%)

+ – следы агглютината, жидкость в капле мутная (25%)

(–) – отрицательный результат, гомогенно мутная жидкость в капле (0%).

СРОК ГОДНОСТИ

Комплект №1/1, №1/2. Сальмонеллезная поливалентная О-сыворотка, сухая — 3 года со дня приемки ОБТК предприятия-изготовителя.