Владельцы патента RU 2500041:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания. Для этого лабораторным животным - крысам добавляют в корм порошок холестерина в количестве 1%, маргарин 10%, мерказолил 10 мг/кг и витамин D - 2,5 ME на кг массы тела. Дополнительно животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, оставляя 2/3 органа. Способ легко выполним, не вызывает гибели животных, является адекватной моделью повреждения эндотелия и развития атеросклеротического процесса. 12 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии, может быть использовано в целях диагностики, профилактики и лечения атеросклеротического процесса.

Атеросклероз и его осложнения продолжают лидировать в структуре заболеваемости и смертности западных стран и России. Летальность при сердечно-сосудистых патологиях в мире вдвое больше, чем от онкологических заболеваний, и в 10 раз выше, чем от несчастных случаев [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В. и др.// Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2006, №5 (6). - С.129-136; Лупач Н.М., Хлудеева Е.А., Лукьянов П.А. и др. // Российский медицинский журнал. - 2010, №4. С.71-74; Титов В.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. 2006, №4. С.310].

Одним из основных факторов риска (ФР) развития атеросклероза является нарушение липидного обмена в организме. Дислипидемия, заключающаяся в снижении α-липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), при повышении β-липопротеинов, или липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), пре-β липопротеинов, или липропротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), способствует развитию атеросклероза. Причем атерогенными свойствами обладают модифицированные, подвергнутые, чаще всего, перекисному окислению, окисленные (окси-ЛПН). Они способствуют повышению синтеза кавеолина-1, что приводит к снижению образования NO эндотелием [Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В. и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2006, №5 (6). - С.129-136; Зотова И.В., Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. // Кардиология. - 2002, №4. - С.57-67; Титов В.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. 2006, №4. С.310]. Окисленные липопротеиды являются активными раздражителями для моноцитов, которые проникают в субэндотелиальное пространство, превращаясь в макрофаги, и затем, по мере накопления в них модифицированных ЛПНП, в пенистые клетки. Активированные макрофаги и пенистые клетки высвобождают биологически активные вещества - факторы роста, противовоспалительные цитокины, молекулы клеточной адгезии, которые способствуют агрегации тромбоцитов, вазоконстрикции и адгезии лейкоцитов, а следовательно, развитию воспалительного процесса в артериальной стенке и прогрессированию атеросклероза. Также окси-ЛПНП индуцируют пролиферацию гладкомышечных клеток (ГМК) сосудов, ЛПВП напротив осуществляют обратный транспорт холестерина (ХС) из сосудистой стенки и макрофагов в печень [Титов В.Н. // Клиническая лабораторная диагностика. 2006, №4. С.310].

Артериальная гипертония (АГ) - второй важный фактор риска развития атеросклероза. Было доказано, что лекарственный контроль давления у гипертоников снижает риск инсультов на 40%, инфаркта миокарда на 8%, а общую летальность от сердечных заболеваний на 10% [Чичерина Е.Н., Милютина О.В. // Клиническая медицина. 2009. - №2. - С.18-21]. При изолированной АГ у мужчин в возрасте 47,5±8,4 г. показатели липидного спектра сдвигаются в сторону повышения общего холестерина (ОХС), триглицеридов (ТГ), ХС ЛПНП, снижения ХС ЛПВП, повышения коэффициента атерогенности (КА) [Овчинникова Л.К., Ягудина Р.И., Овчинникова Е.А. // Российские аптеки. - 2007. - №14. - С.26-31]. Гипертония способствует увеличению проницаемости эндотелия и накоплению липопротеинов в интиме [Шляхто Е.В., Гавришева Н.А., Овчинникова О.А. и др. Влияние индуцированого воспаления на метаболизм коллагена в атеросклеротических бляшках у мышей // Медицинская иммунология. 2008, №6. С.507-512]. Доказано, что причина активации перекисного окисления (ПО) белков и липидов у крыс со спонтанной АГ состоит в усилении продукции кислородных радикалов и неэффективности эндогенных систем их инактивации. Известно также, что развитие спонтанной АГ у крыс сопровождает синдром системного воспалительного ответа: его начальной стадией являются активация (прайминг) полиморфно-ядерных лейкоцитов (нейтрофилов), усиление продукции и секреции ими активных форм О 2 - и Н 2 О 2 и интенсификации ПО белков и заодно жирных кислот (ЖК). Реакция О 2 - с оксидом азота (NO) с образует ONOO- и лишает NO его биологического действия как фактора релаксации. Снижение NO приводит к усилению АД по типу развития порочного круга [Зотова И.В., Затейщиков Д.А., Сидоренко Б.А. // Кардиология. - 2002, №4. - С.57-67].

С современных позиций ключевым звеном в патогенезе атеросклероза считается эндотелиальная дисфункция (ЭД), которая является дисбалансом между основными функциями эндотелия: вазодилатацией и вазоконстрикцией, ингибированием и содействием пролиферации, антитромботической и протромботической, антиокислительной и проокислительной [Лупач Н.М., Хлудеева Е.А., Лукьянов П.А. и др. // Российский медицинский журнал. - 2010, №4. С.71-74; Allison В. Reiss, Amy D. // Journal of investigative medicine. 2006. Vol.54, N. 3. P.123-131; Huber S.A, Sakkinen P., David С.// Circulation. 2001. - N. 103. - P. 2610-2616]. Оксид азота является важным регулятором в сердечно-сосудистой системе, мессенджер, опосредующий ауто- и паракринное влияние. В организме реакция синтеза NO катализируется семейством NO-синтаз (NOS). NOS используют L-аргинин в качестве субстрата и NADPH-диафоразу в качестве кофактора. NADPH-диафораза участвует в транспортировке электронов к простетической группе энзима. Определение NADPH-диафоразы основано на образовании диформазана в присутствии эндогенного β-NADPH и солей тетразолия [Зотова И.В., Затейщиков ДА., Сидоренко Б.А. // Кардиология. 2002, №4. С.57-67; Шуматова Т.А., Приходченко Н.Г., Григорян Л.А. и др. //Тихоокеанский медицинский журнал. 2010, №3. С.59-61; Allison В. Reiss, Amy D. Glass // Journal of investigative medicine. 2006. Vol.54, N. 3. P.123-131].

Данными клинических и эпидемиологических исследований доказано патогенетическое влияние гипертонической болезни и гиперлипидемии на сосудистую стенку, однако четко не установлен период формирования ЭД при совместном действии этих факторов в условиях эксперимента [Овчинникова Л.К., Ягудина Р.И., Овчинникова Е.А. // Российские аптеки. - 2007. - №14. - С.26-31; Воробьева Е.Н., Шумахер Г.И., Осипова И.В., Хорева М.А. и др. // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. - 2006. - №5(6). - 129-136; Нагорнев В.А., Воскаянц А.Н. // Вестн. РАМН, 2006. - №9-10. С.66-74; Davignon J. Ganz P. //Circulation. - 2004; 109: 27-32].

Экспериментальные модели на животных играют важную роль в исследовании заболеваний, в том числе и атеросклероза. Крысы часто используются в моделировании гиперлипидемии, как фактора риска атеросклероза [Мещерская К.А., Бородина Г.П., Королева Н.П. О методике отбора средств, влияющих на обмен холестерина. // Элеутерококк и другие адаптогены из дальневосточных растений. / Под ред. К.А.Мещерской. - Владивосток, 1966. - С.289-294; Санникова А.А., Н.Н.Чучкова, Гайсина Э.Ш. Иммуномодулирующее действие глюкозаминилмурамилдипептида при измененном липидном обмене и атеросклерозе. // Вестник Уральской медицинской экономической науки. - 2008. - №1. - С.64-66. 10; Юдина Т.П., Чаревач Е.И., Цыбулько Е.И., Масленникова Е.В., Плаксен Н.В. Гиполипидемическое действие комплексного эмульгатора, содержащего водоросль ламиналь и водный экстракт из корней мыльнянки Sa ponaria officinalis L., в эксперименте на крысах.// Вопросы питания. - 2008. - Т. 77, №2. - С.76-79]. Их приобретение и содержание относительно недороги, животные просты в обращении, хорошо размножаются в неволе. Из всех экспериментальных животных у крыс лучше всего изучен метаболизм [Куликов В.А., Чиркин А.А. Особенности метаболизма липопротеинов у крыс // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2004. - №1. - С.26-27].

Однако вышеперечисленные исследователи оценивали изменение лишь липидного состава крови в течение небольшого срока наблюдения (от 16 дней до 3 месяцев), в моделях отсутствуют данные о морфологических и функциональных изменениях стенки сосудов, не учитывается включение долговременных компенсаторных механизмов, препятствующих формированию сосудистого поражения.

Известны способы моделирования атеросклероза (п. RU №2033646; кл. G09В 23/28, 1995; п. RU №2327228, кл. G09В 23/28, 2008, бюл. №17; п. RU №2127113, кл. А61К 31/70, А61К 31/505, 1999).

Однако вышеупомянутые способы предусматривают введение медикаментозных препаратов (обзидана - 1 мг на 100 г массы, суспензии гидрокортизона ацетата - 1,5 мг на 100 г массы животного, уридина в дозе 50 мг на 1 кг массы тела один раз в сутки в течение 6-8 дней) на фоне диеты, обогащенной жирами, искусственно изменяют метаболизм животного и неадекватно отражают формирование естественных патогенетических механизмов, играющих ключевую роль в развитии атеросклероза.

За прототип принято моделирование гиперлипидемии у крыс на протяжении длительного времени [Кропотов А.В. Влияние цимифуги даурской и калужницы лесной на некоторые показатели обмена липидов и половую систему (экспериментальное исследование). Автореф. дисс.на соискание ученой степени кандидата мед. наук, Владивосток - 1975, стр.5]. Известный метод придает диете выраженные атерогенные свойства. Крысы находятся на диете с избыточным содержанием жиров в течение 7 месяцев. В корм животных добавляют порошок холестерина в количестве 1%, маргарина 10%, мерказолила 10 мг/кг и витамина D в количестве 2,5 ME на кг массы тела крысы.

Однако в прототипе не оценивалось изменение функциональных и морфологических свойств эндотелия сосудов, исследователи наблюдали лишь изменения липидного спектра в крови и в биоптатах печени крыс.

Учитывая особенности обменных процессов крыс, способствующих формированию их резистентности к жировой нагрузке, авторы изобретения применили сочетание гиперлипидемии с артериальной гипертензией для наиболее выраженного повреждения эндотелия. Способ усиливает нарушение процессов обмена холестерина, формирование стойких признаков атеросклеротического повреждения сосудов с учетом включения срочных и долговременных компенсаторных механизмов.

Задача заявляемого изобретения - разработать экспериментальную модель эндотелиальной дисфункции на основе изучения сочетанного влияния гиперлипидемии и артериальной гипертензии на морфологическую структуру сосудов крыс.

Поставленная задача заявляемого способа достигается путем комбинации вскармливания лабораторных животных атерогенным рационом, состоящим из добавления в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила, и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы, и проведения операции, включающей наложение лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивание верхнего полюса правой почки, при этом оставляя 2/3 органа, что способствует развитию стойкой реноваскулярной артериальной гипертензии. В ходе эксперимента были выполнены следующие этапы:

Проведен мониторинг состояния липидного обмена сыворотки крови при изолированной экспериментальной гиперлипидемии (ЭГ) и при комплексном воздействии атерогенной диеты и артериальной гипертензии (Д+АГ).

Мониторирование уровня артериального давления в моделях ЭГ и Д+АГ.

Определение активности NADPH-диафоразы в эндотелии аорты, бедренных артерий и микрососудах передней брюшной стенки (ПБС) в двух экспериментальных моделях.

Оценка состояния просвета сосудов у экспериментальных животных методом компьютерной магнито - резонансной томографии (МРТ).

Технический результат заявляемого способа заключается в получении стойких структурных нарушений сосудистой стенки, по сравнению с изолированной атерогенной диетой, в целях создания модели атеросклероза на лабораторных животных для диагностики, профилактики и лечения атеросклероза.

Сущность заявляемого изобретения состоит в сочетании гиперлипедемии и реноваскулярной гипертензии у лабораторных крыс.

Гиперлипидемия достигнута с помощью добавления в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы.

Реноваскулярная гипертензия осуществлялась путем наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошиванием верхнего полюса правой почки (оставляя 2/3 органа).

Данная методика позволяет получить стойкие структурные нарушения сосудистой стенки, по сравнению с изолированной экспериментальной гиперлипидемией.

Сущность заявляемого способа поясняется чертежами, где на фиг.1 а-1 в изображено увеличение у опытных крыс ширины общей сонной артерии, плечеголовного ствола и грудной части аорты, соответственно, на 2 месяце исследования, на фиг.2 показано в моделе Д+АГ определение неравномерного контрастирования артерий, что предполагает локальные атерогенные изменения стенки артерий, на фиг.3 - в аорте опытных крыс при окраске гематоксилином и эозином показаны изменения архитектоники эластических волокон, смещение ядер миоцитов на периферию, их уплотнение, клеточная инфильтрация стенки, утолщение эндотелия, Увеличение×400 (камера A×Cam MRc, Германия), окраска гематоксилин и эозин, на фиг.4 визуализируются перинуклеарные оптически пустые образования, увеличение×400 (камера A×Cam MRc, Германия), окраска гематоксилин и эозин; на фиг.5 - окраска гематоксилином и эозином аорта (контроль), увеличение×100 (камера A×Cam MRc, Германия), окраска гематоксилин и эозин; на фиг.6 в бедренных артериях визуализируются перинуклеарные оптически пустые образования увеличение×400, Окраска гематоксилин и эозин; на фиг.7 - окраска гематоксилином и эозином бедренная артерия (контроль), увеличение×400 (камера A×Cam MRc, Германия) окраска гематоксилин и эозин; на фиг.8 - в группе крыс с Д+АГ при окраске аорты Суданом 4 (по методу Окамото), изображена инфильтрация сосуда жировыми включениями, окраска сосудов по методу Окамото, увеличение×100; на фиг.9 в группе крыс с Д+АГ при окраске бедренной артерии Суданом 4 (по методу Окамото) показана инфильтрация сосуда жировыми включениями, увеличение×400; на фиг.10изображен график толщены стенки и интимы аорты и бедренных артерий крыс в модели гиперлипидемии (I группа) и в комплексной модели: гиперлипидемии и артериальной гипертензии (II группа).

Пример конкретного исполнения

Материалом для экспериментальных исследований явились крысы линии Вистар - 45 самцов массой 200-250 г. Животные были распределены на 2 группы:

1 группа - 15 крыс-самцов находились на холестериновой диете в течение 6 месяцев (прототип). Диета заключалась в добавлении в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы.

2 группа 15 крыс-самцов за 15 дней перед началом кормления аналогичным атерогенным рационом (добавление в корм порошка холестерина в количестве 1%, 10% маргарина, 10 мг/кг мерказолила, и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крыс) была произведена операция - наложение лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивание верхнего полюса правой почки, оставляя 2/3 органа (заявляемый способ). Данная операция развивает стойкую реноваскулярную артериальную гипертензию к 8-10 неделе эксперимента.

III группа - контрольная - 15 здоровых крыс-самцов питались обычным рационом. Через 6 месяцев исследования животных каждой группы выводили из эксперимента под эфирным наркозом путем декапитации. Проводили забор сыворотки крови, фрагментов аорты, бедренных артерий и ПБС. Эксперимент осуществлялся со строгим соблюдением требований Европейской конвенции (Страсбург, 1986) по содержанию, кормлению и уходу за подопытными животными, а также выводу их из эксперимента и последующей утилизации. В постановке опытов руководствовались требованиями Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите экспериментальных животных. Исследование одобрено междисциплинарным этическим комитетом (протокол №4, дело №21 от 24.01.2011).

Определение содержание ОХ; ТГ; холестерина ЛПНП, ЛПВП проводили с помощью стандартного колориметрического метода с использованием реагентов «Ольвекс диагностикум» (Россия).

Артериальное давление измеряли в хвостовой артерии с помощью анализатора MLU/ 4С 501 (MedLab КНР). Во время опыта животные находились под наркозом, который избавил их от переживаний и связанных с ними скачков давления.

Метод магниторезонансной томографии заключается в следующем.

Животных перед сканированием усыпляли растворами рометара (Xylazinum, SPORA, PRAHA) в концентрации 1 мг/мл и реланиума в концентрации 2 мг/мл, внутрибрюшинно. МРТ диагностика выполнена на томографе для экспериментальных исследований «PharmaScan US 70/16» (Bruker, Германия) с напряженностью магнитного поля 7,0 Тесла, частотой 300 MHz и катушкой типа BGA 09P. Для ангиографии использовали протокол Head_Angio со следующими параметрами: TR/TE=50.0/5.6; угол наклона 25,0; поле изображения 3,0/3,0/3,0; эффективная толщина среза 30 мм; перекрытие 30,0 мм; матрица 256/256/64 элементов; одно усреднение сигнала, время сканирования 14 мин.

Гистологические препараты фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, Ван-Гизон, Маллори и суданом-4 (Метод Окамото). Описание микропрепаратов проводилось на микроскопе Olympus BX 41. Снимки делались электронной камерой Olympus DP 12, при постоянном увеличении на 100 и на 400. Морфометрия проводилась с использованием окуляр-микрометра MOB - 1-16 ×.

В эксперименте использован гистохимический метод на NADPH-диафоразу по стандартной прописи Hope, Vincent (1989): фрагменты сосудов животных выделяли с помощью лезвия и опускали в охлажденный, приготовленный на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,4) 4% параформальдегид, который из всего класса диафораз сохраняет активность только NADPH-диафоразы. Материал фиксировали в течение 2 часов при температуре 4°С, сутки промывали при той же температуре в 15% растворе сахарозы, 7-8 раз меняя раствор. Из образцов ткани, замороженных в криостате, изготавливали срезы толщиной 10 мкм, монтировали на предметные стекла и помещали в инкубационную среду. Состав и конечная концентрация среды были следующими: 50 мМ Трис-буфер (рН 8,0), 1 мМ NADPH («Sigma»), 0,5 мМ нитросинего тетразолия («Sigma») и 0,2% Тритон Х-100 («Serva»). Инкубацию проводили в течение 60 минут в термостате при температуре 37°С. Затем срезы ополаскивали в дистиллированной воде, обезвоживали и заключали в бальзам по общепринятой в гистологии методике.

Измерение активности фермента производили в эндотелии и гладких миоцитах аорты, бедренных артериях и микрососудах ПБС крыс.

Активность фермента определяли при помощи программы "ImageJ1.37 v" и выражали в единицах оптической плотности. Имеются доказательства прямой зависимости между концентрацией исследуемого фермента и оптической плотностью преципитата, образующегося в результате гистохимической реакции .

Для математической обработки полученных данных использовали программу SPSS v. 16. Сравнение средних значений в выборках осуществляли с помощью непараметрического U-критерия Вилкоксона-Манна-Уитни.

Мониторинг артериального давления показал, что во II экспериментальной группе (Д+АГ) артериальное давление было выше, чем в I группе и в группе здоровых крыс на протяжении всего эксперимента (2, 4, 6 месяцев), что подтверждает формирование реноваскулярного и ренопривного механизмов артериальной гипертензии (таблица 1).

Таблица 1
Показатели артериального давления крыс в моделях экспериментального атеросклероза
Группы крыс	Эксперимент 2 месяца	Эксперимент 4 месяца	Эксперимент 6 месяцев
Систолич. АД (мм рт.ст.)	Диастолич. АД (мм рт.ст.)	Систолич. АД (мм рт.ст.)	Диастолич. АД (мм рт.ст.)	Систолич. АД (мм рт.ст.)	Диастолич. АД (мм рт.ст.)
I группа (ИГ)	113,8±3,6	68,8±1,22	122,06±1,05	66,18±7,08	141,70±4,41	90,89±1,83
II группа (Д+АГ)	131,3±1,5 ;*	83,4±3,2 ;*	140,12±3,25 ;*	90,24±4,44 ;*	161,70±1,66 ;*	99,33±3,41 ;*
III группа (контроль)	115,1±0,7	73,4±0,53	116,25±0,84	70,20±2,18	116,01±3,05	71,44±1,70
*- достоверность различий между I и II группами (рu<0,05);
- достоверность между экспериментальными группами и контрольной группой (р u <0,05).

При исследовании липидного спектра в опытных группах крыс через 2 месяца эксперимента установлено увеличение уровня ОХ, ТГ, ЛПНП, ЛПВП и КА, по сравнению с контрольной группой (р u <0,05) (таблица 2). При этом в группе крыс с артериальной гипертензией значения ОХ, ЛПНП, ЛПВП и КА были достоверно выше (р u <0,05), а уровень ТГ - несколько ниже (p u >0.05), чем в группе крыс с изолированной гиперлипидемией (таблица 2). На 4 месяце эксперимента в I группе крыс сохранялись нарушения липидного профиля, достоверно повышался уровень ЛПНП (р u <0,05). Во II группе значения ЛПВП и ЛПНП снизились и стали ниже, чем в I группе животных, при этом происходило увеличение уровня ТГ и КА. К 6 месяцу эксперимента в обеих опытных группах животных достоверно нарастал уровень ОХ и ТГ. У крыс с атерогенной диетой к этому периоду эксперимента отмечалось увеличение содержания липопротеинов высокой плотности по сравнению с их уровнем на 4 месяце исследования, при этом значения ЛПНП и КА не повышались (р u <0,05), тогда как во II группе крыс (Д+АГ) продолжалась тенденция снижения показателей ЛПНП и ЛПВП. При этом уровень ЛПВП у крыс данной группы стал ниже, чем у здоровых крыс (р u <0,05), произошло увеличение КА - в 2,5 раза по сравнению с I группой и в 4,8 раза по сравнению с контрольной группой крыс (таблица 2). Выявленные изменения подтверждают более выраженные нарушения липидного спектра у крыс II группы (Д+АГ). Снижение сывороточного содержания ЛПНП и ЛПВП у крыс с артериальной гипертензией и гиперлипидемией, вероятно, указывает на усиление их рецепции эндотелием сосудов.

При оценке NADPH-диафоразы сосудов установлено, что в бедренных артериях I опытной и контрольной группы животных содержание NADPH-диафоразы было ниже, чем в аорте, что можно объяснить анатомическими особенностями строения стенок данных сосудов (в бедренных артериях более выражен мышечный компонент) (р u <0,05). В бедренных артериях II группы крыс значения NADPH-диафоразы были несколько ниже, чем в аорте, однако показатели не имели достоверной разницы, что может свидетельствовать о более выраженном нарушении синтеза этого кофермента в аорте при моделировании реноваскулярной гиперетензии. При мониторинге NADPH-диафоразы зарегистрировано снижение ее уровня во фрагментах аорты и бедренных артерий I и II опытных групп крыс с достоверностью различий с контролем (р u <0,05) (табл.3).

Не установлено достоверных различий в содержании кофермента сосудов в зависимости от времени проведения эксперимента (2, 4, 6 месяцев) во всех экспериментальных группах. Наибольшее снижение уровня NADPH-диафоразы определялось на 2 месяце исследования с относительной стабилизацией значений кофермента на низком уровне при последующем мониторинге.

У крыс с гиперлипидемией и артериальной гипертензии значение NADPH-диафоразы в динамике всего эксперимента было ниже, чем в прототипе (p u <0,05), что свидетельствует о более глубоком нарушении функциональных свойств эндотелия. У крыс II группы уровень NADPH-диафоразы в сосудах микроциркуляторного русла снижался ко 2 месяцу исследования, тогда как в группе крыс I группы (ЭГ) достоверное снижение его уровня происходило только к 6 месяцу эксперимента.

При мониторинге состояния артериального русла методом магниторезонансной томографии (МРТ) установлено, что на 2 месяце исследования у опытных крыс ширина общей сонной артерии, плечеголовного ствола и грудной части аорты увеличивалась (таблица 4, фиг.1, фиг.2). Данная сосудистая реакция, обусловлена включением защитно-приспособительных механизмов для поддержания центральной гемодинамики.

Однако к 6 месяцу эксперимента отмечалось сужение просвета перечисленных сосудов (таблица 4), наиболее выраженное во II группе крыс (достоверность различий с I группой (р u <0,05). У крыс II группы регистрировалось уменьшение ширины просвета подвздошных артерий, что свидетельствует о мультифокальности поражения артериального русла при комплексном действии гиперлипидемии и артериальной гипертензии. Определялось неравномерное контрастирование артерий в моделе Д+АГ, что предполагает локальные атерогенные изменения стенки артерий (фиг.2).

Таблица 4
Диаметр просвета сосудов крыс (мм), установленный методом МРТ.
Сосуды	I (диета)	II группа (диета+операция)	Контроль (размер в мм)
2 мес	6 мес	2 мес	6 мес	2 мес	6 мес
Общая сонная	1,57(1,49-1,63)!	1,41(1,38-1,54)	1,34;(1,26-1,47)	1,14;(1,10-1,19)	1,27(1,19-1,32)	1,23(1,20-1,31)
Внутренняя сонная	0,79(0,76-0,81)	0,72(0,70-0,73)	0,78(0,76-0,84)	0,44(0,42-0,50) !	0,8(0,78-0,89)	0,77(0,75-0,91)
Плечеголовной ствол	1,54(1,51-1,58)!	1,38(1,43-1,50)	1,47(1,60-1,65)!	1,23(1,21-1,25)	1,31(1,28-1,33)	1,30(1,27-1,32)
Мозговые артерии	0,49(0,46-0,56)	0,40(0,38-0,41)	0,49(0,45-0,52)	0,44(0,42-0,50)	0,40(0,37-0,47)	0,41(0,39-0,44)
Гр. часть аорты	2,13(2,05-2,16)!	1,78(1,76-1,79)×	2,32(2,26-2,33)!	1,51; (1,47-1,53) !×	1,95(1,83-1,97)	1,86(1,80-1,93)
Бр. часть аорты	1,61	1,41	1,66		1,64	1,62(1,54-1,63)
	(1,59-1,63)	(1,40-1,44)	(1,60-1,68)	1,53(1,43-1,56)	(1,60-1,66)
Общие подвздошные артерии	1,1(0,94-1,05)	0,82(0,80-0,87)	0,94(0,92-0,96)	0,74(0,71-0,75)!×	0,98(0,96-1,2)	0,93(0,90-0,99)
Примечание: данные представленные в виде Медианы (НК-ВК).
! - достоверность между экспериментальными группами и контрольной группой (р u <0,05).
- достоверность различий между I и II группами (p u <0,05);
× - достоверность различий между показателями на 2 и 6 месяцах эксперимента.

Оценка гистологической структуры артериальной стенки показала, что наиболее выраженные изменения сосудов регистрируются к 6 месяцу эксперимента. В аорте и бедренных артериях опытных крыс при окраске гематоксилином и эозином наблюдаются изменения архитектоники эластических волокон, визуализируются перинуклеарные оптически пустые образования, смещение ядер миоцитов на периферию, их уплотнение, клеточная инфильтрация стенки, утолщение эндотелия (фиг.3, фиг.4, фиг.6,) по сравнению с интактными крысами (фиг.5, фиг.7). При этом наиболее выраженные изменения морфологии артерий регистрируются во второй экспериментальной группе (Д+АГ) (фиг.4, фиг.6). При окраске артерий Суданом 4 по методу Окамото у опытных крыс с Д+АГ выявлена инфильтрация сосуда жировыми включениями. При этом отложение жира заполняют пустоты, выявленные при окраске гематоксилином и эозином (фиг.8, фиг.9).

В ПБС у опытных крыс наблюдается уменьшение числа микрососудов (в I группе крыс выявляются 5-7 микрососудов, во II группе - 3-4 микрососуда в поле зрения, тогда как у контрольных крыс - 8-10 микрососудов). Сосуды микроциркуляторного русла у крыс II экспериментальной группы в виде штрихов с пролиферацией эндотелиоцитов, тогда как у контрольных крыс - овальной или округлой формы. Увеличивалась толщина микрососудов передней брюшной стенки в опытных группах крыс. При этом максимальное утолщение стенки микрососудов наблюдалось во II экспериментальной группе (М=4,62 (4,36-4,72) мкм во второй группе, М=2,31 (2,12-2,36) мкм в I группе, и 1,54 (1,50-1,62) мкм - у контрольных крыс). Зарегистрировано увеличение толщины стенки аорты и бедренных артерий у опытных крыс. У крыс с артериальной гипертензии регистрировалось увеличение толщины стенки и интимы сосудов, по сравнению с моделью изолированной экспериментальной гиперлипидемии (фиг.10).

Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что в заявляемом способе, сочетающем артериальную гипертензию и гиперлипидемию к 6 месяцу эксперимента установлены изменения липидного спектра сыворотки крови (повышение уровня OX, ТГ, снижение ЛПВП, увеличение КА) по сравнению с прототипом. Заявляемый способ позволяет установить стойкое увеличение систолического и диастолического артериального давления со 2 по 6 месяц исследования. По сравнению с прототипом зарегистрировано снижение активности NADPH-диафоразы в эндотелии сосудов к 6 месяцу эксперимента. Наблюдалось повреждение сосудов: деформация эластических волокон, увеличение толщины стенки и интимы, клеточная инфильтрация, отложение жировых включений в стенке, сужение просвета сосудов, уменьшение количества микрососудов ПБС.

Способ моделирования атеросклероза, включающий кормление исследуемых животных атерогенным рационом, состоящий из добавления в корм порошка холестерина в количестве 1%, маргарина 10%, мерказолила 10 мг/кг и витамина D - 2,5 ME на кг массы тела крысы, отличающийся тем, что наряду с кормлением атерогенным рационом животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, при этом оставляя 2/3 органа.

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования первичного билиарного цирроза. Для этого в просвет бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки и терминальный отдел подвздошной кишки крысы вводят по 0,08-0,12 мл 45-50% спиртового раствора пикрилсульфоновой кислоты с интервалом 5-10 минут.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано при моделировании хронической гнойной костной раны. Формирование костного дефекта проводят вдоль оси кости, помещают в него смесь культуры музейного штамма Staphylococcus Aureus №5 в количестве 40-45 млн KОЕ на 1 кг массы тела экспериментального животного и 0,1 мл стерильного кварцевого песка.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования диабетического макулярного отека. Для этого крысе вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Лабораторным животным через 9 недель после прекращения воздействия токсиканта проводят стимуляционную миографию.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого моделируют ишемию мышц голени, в том числе при одновременном дополнительном моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования энцефалопатии в пренатальном периоде развития животного. Для этого самкам мелких лабораторных животных ежедневно подкожно вводят раствор нитрита натрия в дозе 50 мг/кг с 10-го по 19-й день беременности.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения фармакологического обеспечения выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для изучения возможности коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной стоматологии, и касается моделирования деминерализации эмали зуба. Для этого на удаленный зуб фиксируют брекет. Ограничивают очаг, который расположен на вестибулярной поверхности зуба вокруг брекета, восковым покрытием. Погружают зуб в индивидуальную емкость с деминерализирующим гелем, состоящим из (вес.%): дигидрофосфата кальция - 0.04-0.08, молочной кислоты - 0.8-1.0, праестола 2510 - 3.0-4.5, раствора гидроксида натрия - 0.4, дистиллированной воды - остальное. Затем емкость с зубом помещают в термостат при pH=4.5 на 96 часов. Способ обеспечивает повышение четкости очага деминерализации. 4 ил., 2 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и предназначено для изучения принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам эффлюксного белка-транспортера Pgp (гликопротеина-Р). Для этого моделируют в эксперименте состояние индукции функциональной активности этого белка. В качестве препарата-индуктора используют финастерид. Препарат вводят кроликам внутрижелудочно в форме суспензии в оливковом масле в суточной дозе 0,225 мг/кг массы тела животного в течение 14 дней. Способ обеспечивает создание модели, являясь безопасным, не требующим дорогостоящего лабораторного спецоборудования и материалов. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаза. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока начиная с 7 суток после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва. 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения изолированного неврита зрительного нерва. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине и тканевой инженерии, и может быть использовано для получения экстрацеллюлярных матриксов кровеносных сосудов малого калибра. Для этого на первом этапе тканей фрагмент кровеносного сосуда отмывают дистиллированной водой в течение 1 часа при температуре +4°С. Затем фрагмент помещают в 0,05% раствор трипсина и 0,02%-ной ЭДТА на 1 час при температуре +37°С. На третьем этапе проводят обработку в 0,075% растворе додецилсульфата натрия в течение 24 часов при температуре 26°С. Далее фрагмент помещают в 0,25%-ный раствор Тритон Х-100 на 24 часа при температуре 26°С. На четвертом этапе данный фрагмент обрабатывают раствором, содержащим РНКазу А 20 мкг/мл и ДНКазу I 200 мкг/мл, в течение 6 часов при температуре +37°С. При этом после каждого этапа обработки фрагмент кровеносного сосуда трижды промывают в фосфатно-солевом буферном растворе по 10 минут. Весь процесс обработки осуществляют при постоянном перемешивании растворов и одновременной вибрации, создаваемой вибромотором, который расположен на наружной стенке емкости. Способ позволяет повысить качество децеллюляризации кровеносных сосудов малого калибра, сохранить их целостность и ультраструктуру для последующей иммобилизации клеток реципиента. 2 пр., 6 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации. У крыс моделируют сахарный диабет путем интрабрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят крысиный VEGF 164 на 1-е, 3-и и 7-е сутки по 1 мкг, в суммарной дозе 3 мкг. Способ обеспечивает неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем изучать эффективность и определять целесообразность проводимой терапии этого заболевания. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования мелкоочаговых мозговых геморрагий у новорожденных крыс. Для этого новорожденных крыс в возрасте 3-х дней помещают в камеру и подвергают воздействию звука силой 70 дБ, частотой 110 Гц, на протяжении 60 минут. Способ обеспечивает развитие мелкоочаговых мозговых геморрагий в коре головного мозга у 100% новорожденных крыс, без разрыва крупных сосудов, что наиболее близко соответствует клинической картине мозговых геморрагий у новорожденных детей. 7 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии. Для выявления психотропных свойств изучаемых веществ осуществляют моделирование эмоционально-физической стрессовой ситуации, достигаемой помещением животных в цилиндр с холодной водой. Регистрируют время решения и выполнения задачи покинуть цилиндр при помощи предлагаемых средств спасения (рейка, лестница и веревка), установленных в цилиндре. Рассчитывают процентную вероятность решения задачи. Осуществляют расчет индексов, характеризующих психоэмоциональное и моторно-двигательное воздействие изучаемого вещества по определенным математическим формулам. Способ является технически простым, финансово низкозатратным, имеет высокий уровень воспроизводимости, позволяет с низкими затратами времени и высокой долей вероятности определить психоседативное или психостимулирующее действие изучаемого вещества.1 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной кардиологии, и может быть использовано для изучения вопросов патогенеза нефрогенной артериальной гипертензии и для скрининговых и детальных фармакологических исследований. Для моделирования ренопаренхиматозной артериальной гипертензии взрослым крысам-самцам массой производят химическое повреждение паренхимы почек путем введения 0,1 мл 4% параформальдегида в верхний полюс обеих почек. Способ обеспечивает в короткие сроки получение стойкого повышения артериального давления, высокую воспроизводимость результата, простоту выполнения процедуры, ее малую инвазивность, короткий реабилитационный период при формировании значимых морфологических и биохимических перестроек в органах-мишенях, аналогичных клиническим вариантам ренопаренхиматозной артериальной гипертензии. 2 табл., 4 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения механизмов коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных. Способ включает воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней с 14 дня беременности внутрибрюшинным введением N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. После этого проводят однократное воспроизведение 10-минутного дистантного ишемического эпизода задней конечности на 21 день беременности путем пережатия бедренной артерии с последующей реперфузией. Через 90 минут проводят сосудистые пробы с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции. Способ позволяет изучать NO - не обусловленные механизмы защитного эффекта при коррекции эндотелиальной дисфункции в специфических условиях эксперимента. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания. Для этого лабораторным животным - крысам добавляют в корм порошок холестерина в количестве 1, маргарин 10, мерказолил 10 мгкг и витамин D - 2,5 ME на кг массы тела. Дополнительно животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, оставляя 23 органа. Способ легко выполним, не вызывает гибели животных, является адекватной моделью повреждения эндотелия и развития атеросклеротического процесса. 12 ил., 4 табл., 1 пр.

Differential effect of Pistacia vera extracts on experimental atherosclerosis in the rabbit animal model: an experimental study
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2917426/

Липид-обогащенные диеты и окислительный стресс являются факторами риска развития атеросклероза. Эффекты метанольных (ME) и циклогексановых (CHE) экстрактов гайки Pistacia vera, часто включаемые в средиземноморскую диету, изучались в кроличьей модели атеросклероза.

Двадцать четыре новозеландских белых кролика получали атерогенную диету (контрольная группа), дополненную ME (группа ME) или CHE (группа CHE) в течение 3 месяцев. Ранее для исследования химических профилей экстрактов были разработаны GC-MS и UHPLC LC-DAD-ESI (-) — HRMS / MS. Образцы крови на начальном и месячном уровнях липидного профиля, перекисное окисление липидов и функция печени. Аорту, миокард и печень гистологически исследовали через 3 месяца.

Группы ME и CHE имели значительно более высокий уровень ЛПВП и не значительно меньший средний уровень ЛПНП холестерина в% от исходного уровня, чем контрольная группа. Триацилглицерин был значительно выше в группе CHE против контроля. Значения MDA были значительно ниже в группе ME по сравнению с контролем и CHE. ALT и AST были значительно выше в группе CHE против Control. γ-GT был ниже в группе ME по сравнению с контролем. Толщина интимы аорты была значительно меньше в группах ME и CHE против контроля; Атеросклеротические поражения группы ME были значительно менее обширными по сравнению с контролем групп и CHE. Только у группы CHE была значительная жировая инфильтрация печени.

Во время кратковременного введения одновременно с атерогенной диетой оба экстракта P. vera были полезны для HDL-, LDL-холестерина и толщины интимы аорты. ME дополнительно представил антиоксидантный эффект и значительное уменьшение поверхностных повреждений аорты. Эти результаты показывают, что диетическое включение P. vera, в частности ее ME, потенциально выгодно при управлении атеросклерозом.

Сердечно-сосудистые заболевания являются ведущей причиной смертности в промышленно развитой части мира, основным состоянием которой является атеросклероз . Развитие и прогрессирование атеросклеротических поражений изучено широко. Было проведено множество клинических исследований в отношении диетических протоколов, таких как исследование «Семь стран» средиземноморской диеты, которое включает оливковое масло . Другие клинические исследования включали фармацевтические и хирургические вмешательства только или в комбинации . Научные свидетельства патогенеза и терапии атеросклероза в прошлом веке получили в значительной степени протоколы исследований на животных моделях.

Кролик, одна из наиболее важных моделей для изучения атеросклероза, быстро реагирует на стимуляцию атеросклеротических поражений с помощью диеты с высоким содержанием холестерина . Некоторые диетические исследования использовали эту модель, в том числе введение оливкового или рыбьего жира и различных экстрактов семян или масел, полученных из семян подсолнечника, арахиса, семян льна или фундука . Пищевая гайка, потребляемая либо отдельно, либо как ингредиент в традиционных рецептах, — это фисташковый орех из дерева Pistacia vera, который принадлежит к семейству Anacardiaceae и распространяется в центральной и юго-восточной Греции, а также в других странах Средиземноморья и Ближнего Востока. Насколько нам известно, опубликованы только исследования in vitro относительно его биологически активного воздействия на развитие атеросклероза . Поэтому мы стремились исследовать влияние введения P. vera cyclohexane (CHE) и метанольного экстракта (ME) на экспериментальную модель кроликов атеросклероза на биохимию сыворотки, а также поражение аорты, сердца и печени.

В таблице 1 показаны описательная статистика измеренных параметров 3-х групп. В таблице 2 показаны средние изменения в процентах от исходных показателей биомассы организма, липидного профиля и антиоксидантного статуса, а также общие статистические значения. В таблице 3 показаны средние изменения в процентах от исходного уровня активности ферментов печени и общие статистические значения. В таблице 4 показан морфометрический анализ аорты кроликов.

Описательная статистика: средние значения ± стандартное отклонение массы тела и биохимических параметров

Средние значения веса тела, профиля липидов и окислительного стресса в течение периода наблюдения в трех группах: контроль (атерогенная диета), ME (атерогенная диета плюс ME), CHE (атерогенная диета плюс CHE).

Все переменные представлены как среднее ± SD

Процент изменения массы тела, профиля липидов и окислительного стресса в сыворотке кролика

Медиана% изменяется от исходного уровня массы тела, липидного профиля и значений окислительного стресса в течение периода наблюдения в трех группах: контроль (атерогенная диета), ME (атерогенная диета плюс ME), CHE (атерогенная диета плюс CHE).

Значительная разница при р

b Значительная разница при p

Процент изменения активности ферментов печени в сыворотке кроликов

Медиана активности ферментов печени% изменяется от исходного уровня в течение периода наблюдения в трех группах. Группа контроля: атерогенная диета, группа ME: атерогенная диета плюс ME, группа CHE: атерогенная диета плюс CHE

Значительная разница при р

b Значительная разница при p

Общий Sig: Общая значимость, NS: Незначительное

Морфометрический анализ на аортах кролика

Результаты выражены как медиана ± SD.

Группа контроля: атерогенная диета, группа ME: атерогенная диета плюс ME, группа CHE: атерогенная диета плюс CHE

Значительная разница при р

b Значительная разница при p

Конечное среднее изменение% от базовой линии в группах Control, ME и CHE не было статистически значимым (таблица 2), хотя наблюдалось умеренное увеличение абсолютных средних значений (таблица 1).

Уровни липидов в плазме всех трех групп были сходными на исходном уровне. Среднее изменение% от базовой линии в течение периода наблюдения, описанного ниже, показано в таблице 2.

Среднее изменение% от базовой линии до 1-го месяца для групп ME и CHE было статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой (p = 0,01 и 0,05 соответственно).

Среднее изменение группы CHE было статистически значимо выше по сравнению с контролем групп и ME в 1-й и 2-й месяцы, тогда как группы ME и CHE имели статистически значимые более высокие значения, чем контрольная группа во 2-м (p = 0,001 и p

Среднее изменение группы CHE было статистически значительно ниже по сравнению с контрольной группой в 1-м и 2-м месяце (p

Медиана% изменения группы ME была статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой в 1-й и 2-й месяцы (р

Среднее изменение группы CHE было статистически значимо выше по сравнению с группой ME во 2-м и 3-м месяце (p = 0,032 и 0,012 соответственно). Более того, среднее изменение группы МЭ статистически значимо отличалось по сравнению с контрольной группой в 1-м и 3-м месяце (p

Медиана% изменения группы ME была статистически достоверно выше по сравнению с контрольной группой во 2-м месяце (p = 0,05), тогда как среднее изменение группы CHE по сравнению с контрольной группой было значительно выше во время исследования (p

Медиана% изменения значений плазмы всех групп не показывала статистически значимого увеличения за весь экспериментальный период, когда группа CHE имела более высокие значения только в 3-м месяце (p = 0,007).

Среднее изменение значений группы ME по статистике было статистически значимым ниже по сравнению с контролем групп и CHE в течение третьего месяца эксперимента (p

Макроскопические образцы аорты из группы Control и CHE показали обширные атеросклеротические бляшки, покрывающие почти всю верхнюю часть вырезанной аорты (таблица 4 и фиг.1A и 1E). Показатели группы ME показали менее обширные поражения по сравнению с группой A, а также по сравнению с группой CHE (таблица 4 и фиг.1C).

Макро- и микроскопические изображения представителей аорты у кроликов трех групп. 1A, 1C, 1E являются репрезентативными изображениями из грубых образцов аорты, принадлежащих группам Control, ME и CHE, соответственно. Стрелки указывают на образования атеросклеротических бляшек. Как показано, контрольная группа демонстрировала обширные атеросклеротические бляшки, покрывающие почти всю верхнюю часть вырезанной аорты. Группы ME и CHE проявляли менее обширные поражения по сравнению с контрольной группой, и между этими двумя группами группа ME имела наименьшее образование поражения. 1B, 1D, 1F — микрофотографии с 1A, 1C, 1E соответственно (эозин — гематоксилин, первоначальное увеличение × 100). На рисунке 1B (контрольной группы) показана уязвимая доска с множеством пенных клеток, воспаление и замечательное утолщение интимы. Рисунок 1D (группа ME) показывает вышеописанное поражение, но менее обширная (толщина интима / среды меньше, чем в 1B. Рисунок 1F (группа CHE) демонстрирует эндотелий аорты с подтверждением утолщения и многих пенных клеток, однако интима / среда Отношение меньше, чем в 1 В. Стрелки указывают ширину эндотелия.

Гистопатологические данные группы Control и CHE показали уязвимые бляшки со многими пенными клетками, воспаление и замечательное утолщение интимы (рис.1B и 1F). В группе ME обнаружены описанные выше поражения, но менее обширные (рис.1D).

Гистологическое исследование сердца не выявило значительных изменений между группами.

Гистологическое исследование печени не выявило значительных изменений между Групповым контролем и МЭ. Группа CHE показала статистически значимую жировую инфильтрацию по сравнению с контрольной группой.

Негенетический гиперлипидемический кролик — это животная модель, широко используемая при исследованиях атеросклероза. Различные уровни диетического холестерина (0,2-1,3%) были использованы для создания эксперимента экспериментально , а одновременное введение других потенциально полезных веществ изучалось в периоды, варьирующие от 8 до 14 недель .

Заводы Pistacia — это деревья или кустарники, принадлежащие Греции и другим странам Средиземноморья и Ближнего Востока. Было показано, что среди них было обнаружено, что у P. lentiscus антиоксидант , антибактериальный , печеночно-защитные и цитостатические эффекты и для предотвращения холестерина ЛПНП от окисления in vitro . Было показано, что P. terebinthus оказывает полезное действие на маточные кондиломы и меланомы кожи . На P. vera было проведено мало исследований. Сообщалось, что он обладает противогрибковыми эффектами растений . P. vera ME содержит небольшие количества катехина, полифенольного флавоноида, который показывает потенциально более высокую антиоксидантную активность, чем аскорбиновая кислота и α-токоферол в исследованиях in vitro . Катехин и его продукты также были указаны как факторы снижения риска сердечно-сосудистых заболеваний путем снижения уровня холестерина в сыворотке, уменьшения агрегации тромбоцитов и снижения артериального давления .

В настоящем исследовании мы исследовали влияние совместного введения P. vera на прогресс индуцированного холестерином атеросклероза модели животного кролика в течение 12 недель. Мы решили отдельно управлять ME или CHE P. vera в разных группах животных, чтобы иметь возможность идентифицировать, какие компоненты будут отвечать за потенциально разные результаты. Анализ GC-MS CHE показал, что его основными соединениями являются b-ситостерол, сквален, стигмастерин, олеиновая и пальмитиновая кислоты. Клинические испытания уже показали защитные эффекты таких растительных стеролов при развитии ишемической болезни сердца . Кроме того, анализ МЭ с использованием методов LC-HRMS / MS выявил присутствие галлового метилового эфира, протокатехиновой кислоты и галловой кислоты. Показано, что галлова кислота обладает антиатерогенной активностью .

Результаты настоящего исследования показывают положительный эффект совместного введения P. vera ME и CHE в обогащенной холестерином диете при изменениях HDL-C. ME также продемонстрировало меньшее изменение MDA от исходного уровня, тем самым проявляя мягкий антиоксидантный эффект. Благоприятный эффект ЛПНП-С не был статистически значимым. Другие исследованные биохимические параметры (TC, TAG и ферменты печени) не продемонстрировали положительного эффекта ME при анализе данных с использованием средних средних значений. Анализ наших данных с использованием средних абсолютных значений показал статистически значимый защитный эффект МЭ по вышеуказанным параметрам (табл. 1). Однако из-за отсутствия нормального распределения значений, использование непараметрического анализа (тесты Крускал-Уоллиса и Манна-Уитни) было сочтено необходимым.

Несколько растительных веществ оказывают благотворное влияние на биохимию крови у кроликов, получающих холестерин. Полифенол оливкового масла, известный как гидрокситирозол, увеличивал уровни HDL-C атерогенных кроликов с диетическим питанием . Мука из кунжута благотворно влияла на общий уровень холестерина и триглицеридов у кроликов, получавших холестерин . Кроме того, сециолаларицирезиновый диглюкозид (SDG), лигнин растений, выделенный из льняного семени при введении кроликам в течение 8 недель, приводил к уменьшению LDL-C и увеличению ЛВП-C и антиоксидантной активности , аналогично нашему исследованию. Кроме того, в другом исследовании на кроликах с использованием этанольного экстракта лизимахиоидов Hypericum Boiss var lysimachioides (Guttifera) показано статистически значимое снижение уровней MDA, а также увеличение уровней HDL-C, что согласуется с нашим исследованием .

Наши результаты показали, что лечение обоими экстрактами P. vera вызывает умеренное увеличение значений TC, хотя это не сильно отличается от контрольной группы во втором и третьем месяце введения.

Средние значения HDL-C в контрольной группе были ниже в конце эксперимента, тогда как совместное введение экстрактов P. vera (группы ME и CHE) значительно ингибировало это снижение. Учитывая, что низкий уровень HDL-C связан с более высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний, подтверждается, что увеличение уровня HDL-C приведет к защитному эффекту против атеросклероза после длительного введения экстрактов P. vera.

Наши результаты показали значительные различия в уровнях MDA в плазме между МЭ и контрольными группами. Это говорит о том, что положительный эффект P. vera ME на некоторые липиды и аорту может быть вызван мягким антиоксидантным эффектом.

В нашем исследовании уровни ферментов печени увеличились, достигнув максимальных уровней третьего месяца во всех группах. В частности, изменения ALT и AST были увеличены в группах ME и CHE по сравнению с контролем. Как клинические, так и экспериментальные исследования показали, что повышенные АЛТ и АСТ могут быть прогностическими для развития атеросклероза . Кроме того, изменения γGT группы ME были статистически значительно ниже в третьем месяце по сравнению с контрольной группой. Это свидетельствует о положительном эффекте P. vera ME и CHE в функции желчной системы атеросклеротических животных. В исследовании Hakimoglu et al. печеночная гидропическая и липидная дегенерация была снижена в этанольном экстракте лисимахоидов Hypericum по сравнению с кроликами, получавшими только с обогащенной холестерином диетой. Этот вывод похож на наш, где гистология печени, которую я кормила кроликов, была менее затронута, чем группа холестерина (контрольная группа), хотя статистически значимой разницы не было. В частности, кролики контрольной группы страдали от повреждения печени, характеризующегося стеатозом и фиброзом, что было еще более очевидным в группе CHE.

Макроскопическое образование бляшек в группе ME было менее обширным по сравнению с контролем групп и CHE. Как и в нашем исследовании, другие исследователи отметили, что, несмотря на увеличение уровня холестерина в сыворотке после введения экстракта, результаты патологии образцов аорты могут показать улучшение атеросклероза . Aguilera et al. обнаружили, что девственные оливковое масло и рыбьего жира уменьшают развитие атеросклеротических бляшек. Было также показано, что масло орехового ореха уменьшает атеросклеротические поражения в аорте холестерина, питающегося кроликами . Кроме того, эффект введения зеленого чая, содержащий соединения, полученные из эпикатехина у кроликов, оказал благотворное влияние на артериальные атеросклеротические бляшки . Это согласуется с нашими результатами, что свидетельствует о значительном положительном эффекте P. vera ME на развитие атеросклероза аорты. В частности, группа ME продемонстрировала значительное ингибирование атеросклеротических бляшек как по их толщине, так и по ширине в просвете аорты. Это может быть связано с основными компонентами МЭ, такими как галльная кислота и катехин, которые могут быть ответственны за этот процесс ингибирования, как уже указывалось . С другой стороны, группа CHE проявляла более мягкое ингибирование атеросклероза относительно толщины бляшек, что можно объяснить наличием b-ситостерола, сквален, стигмастерола, олеиновой и пальмитиновой кислот, как показано аналогично .

Группа CHE проявила самую низкую антиоксидантную активность. Этот эффект может быть связан с обширными, но не столь сложными атеросклеротическими поражениями, наблюдаемыми в образцах аорты группы CHE, по сравнению с таковыми для группы Control и ME. Однако группа ME проявила гораздо более сильную антиоксидантную активность. Статистически значимый наблюдаемый антиоксидантный эффект МЭ, очевидный при анализе MDA, также значительно уменьшает осаждение аортальной бляшки. С другой стороны, CHE не влиял на степень атеросклеротических поражений. Эти данные могут быть отнесены к компонентам P. vera ME, оказывающим антиоксидантную активность .

В заключение, при кратковременном введении одновременно с атерогенной диетой оба экстракта P. vera были полезны для HDL-, LDL-холестерина и толщины интимы аорты. ME дополнительно представил антиоксидантный эффект и значительное уменьшение поверхностных повреждений аорты. Эти результаты показывают, что диетическое включение P. vera, в частности ее ME, потенциально может быть полезным при лечении атеросклерозом. P. vera ME и CHE впервые используются in vivo в наших знаниях при изучении атеросклероза и показывают многообещающий эффект в отношении процесса ингибирования. Больше исследований требуется до того, как P. vera может быть клинически рекомендована для диетического включения для управления атеросклерозом.

Двадцать четыре обычных новозеландских белых кролика (2,7 ± 0,2 кг), приобретенных у греческого сертифицированного коммерческого заводчика, были случайным образом разделены на три равные группы (контроль, ME и CHE) и содержались отдельно в клетках из нержавеющей стали с бесплатным доступом к пище и водопроводной воды. Условия животного жилища составляли 20 ± 2 ° C, относительная влажность 60 ± 5%, в 12:12 ч свет: темный цикл. Животных обрабатывали в соответствии со стандартами, установленными Европейской директивой 86/609 / EEC. Местные ветеринарные органы и комитет по этике животных одобрили (лицензия № K / 950) исследование. Контрольная группа получила стандартную сбалансированную диету с кроликом (химический состав: общая жирная кислота 2,5%, целлюлоза — 18,5%, общий белок — 16,5%, вода — 13%, зола — 11%, кальций — 1,4%, лизин — 0,6%, метионин-цистин — 0,55%, фосфор 0,55%, натрий 0,25%), обогащенный 1% холестерина (Dolder, Швейцария) (атерогенная диета), группа ME получила атерогенную диету плюс ME (1% по весу) и атерогенную диету группы CHE плюс CHE (5% по массе) , Диеты были свежеприготовлены каждые три дня перед употреблением.

Количество порошкообразных фисташковых орехов на 15 кг, собранных на греческом острове Эгина, экстрагировали при комнатной температуре, сначала обезжиривали циклогексаном, получая 7,5 кг зеленого масляного остатка после выпаривания растворителя. CHE омыляли обычной процедурой, приводящей к этерифицированным жирным кислотам. Метиловые эфиры жирных кислот и неосажденный остаток анализировали с помощью GC и GC / MS с получением в качестве основных соединений b-ситостерола, сквален, стигмастерола, олеиновой кислоты и пальмитиновой кислоты (см. Дополнительный файл 1)
,

После извлечения порошкообразных фисташковых орехов циклогексаном растительный материал дополнительно экстрагировали дихлорметаном, получая 1,5 кг зеленого маслянистого экстракта, а затем метанолом с получением остатка 500 г после выпаривания растворителя. Количество 400 г остатка подвергали смоле XAD-4 для удаления сахара и получали ME, обогащенные фенольными соединениями. Для описания химического профиля обогащенного экстракта был разработан метод LC-DAD-ESI (-) — HRMS / MS. Анализ проводили с использованием устройства UHPLC, подключенного к высокоэффективному гибридному спектрометру LTQ-Orbitrap Discovery. В качестве стандартов для анализа использовались фенольные соединения, галоидный метиловый эфир (1), галловая кислота (2), протокатехиновая кислота (3) катехин (4) и эпикатехин (5), а их идентификация была выполнена путем сравнения времени удерживания, UV-Vis и высокоточные масс-спектры пиков в образце с образцами стандартных соединений.

В прилагаемом дополнительном файле 1 представлен подробный анализ компонентов экстрактов.

Все животные голодали за 12 часов до взятия крови. Они были слегка успокоены (кетамин гидрохлорид 12 мг / кг, ксилазин 2,5 мг / кг массы тела, им) для процедуры, чтобы избежать стрессового воздействия. Образцы крови из ушной артерии животных помещали в пробирки Вассермана, содержащие антикоагулянт в течение 0, 1, 2 и 3 месяца экспериментальной процедуры. Плазму отделяли центрифугированием при 3500 об / мин в течение 15 мин. Общий уровень холестерина в плазме (ТС), холестерин липопротеинов высокой плотности (HDL-C), холестерин липопротеинов низкой плотности (LDL-C), концентрации триацилглицерина (TAG), сывороточная аланинаминотрансфераза (ALT), аспартат-аминотрансфераза (АСТ) и гамма-сыворотка активность глютамилтрансферазы (γGT) измеряли коммерческими наборами ферментативных тестов в соответствии с инструкциями производителя (Biomerieux, Lyon, France) с использованием автоматического анализатора (тип 7170A, Hitachi, Tokyo, Japan). MDA рассчитывали по ручному методу реактивных веществ тиобарбитуровой кислоты (TBARS), как описано Yagi . В конце экспериментального исследования и после последнего взятия пробы крови при седации кроликов эвтаназировали тиопенталом натрия (30 мг / кг внутривенно).

Аорта была удалена из артерии аорты в подвздошную бифуркацию. Ткани, прилипающие к адвентиции, удаляли, а аорту разрезали продольно вдоль средней вентральной стенки. Затем аорту фиксировали в 10% -ном фосфатном буферном растворе формалина. Сняли просветную поверхность каждого образца аорты, и изображение было сохранено в электронном виде. Разделы из всех образцов были получены из трех стандартных участков (непосредственно дистальных к ветви левой подключичной артерии, в седьмой межреберной артерии и непосредственно позади целиакии). Эти образцы были встроены в парафиновые блоки и окрашены гематоксилин-эозином. Гистопатологические атеросклеротические поражения аорты были классифицированы по классификации Стари , а толщина и площадь поверхности атеросклеротических поражений в стенке аорты были полуквантизированы с использованием автоматизированной системы анализа изображений . Вкратце, оцениваемые параметры: утолщение интимы, накопление пенных клеток, моноядерные инфильтраты, липидное ядро ​​и образование волокнистых колпачков. Цифровые изображения были получены из слайдов с помощью фотомикроскопа (Nikon Eclipse 80i, Nikon Corp, Токио, Япония), оснащенного цифровой камерой (Nikon DS — 2 МВт). Все изображения были перенесены на ПК с соответствующим программным обеспечением (Image ProPlus v. 5.1, Media Cybernetics, MD, USA).

Сердце и печень взвешивали и фиксировали в 10% -ном фосфатном буферном растворе формалина. Были взяты стандартные секции, встроенные в парафиновые блоки для гематоксилин-эозина, а образцы миокарда дополнительно окрашивались трихромным пятном Массона.

Повреждения миокарда оценивались от 0 до 3 относительно интерстициального отека, фиброза и инфильтратов пенных клеток. Повреждения печени были классифицированы в четырех классах, как описано ранее , в отношении изменений архитектуры, жировой инфильтрации и фиброза.

Данные были выражены как средние значения ± стандартное отклонение (SD), а также медианные значения из-за нарушения нормальности. Для анализа нормальности параметров использовался тест Колмогорова-Смирнова.

Чтобы указать тенденцию в первые 3 месяца лечения, средний процент изменений после 1, 2 и 3 месяцев переменных был рассчитан. Сравнение процентного изменения от базового значения переменных в течение периода наблюдения и переменных гистопатологии между тремя группами было проанализировано с использованием теста Крускала-Уоллиса и теста Манна-Уитни (парные сравнения).

Все тесты были двусторонними, статистическая значимость была установлена ​​при p

P.vera: Pistacia vera; ME: метанольный экстракт Pistacia vera; CHE: циклогексановый экстракт Pistacia vera; GC: газовая хроматография; МС: масс-спектрометрия; UHPLC: ультравысокая жидкостная хроматография; LC: жидкостная хроматография; DAD: детектор диодных матриц; ESI: ионизация электронного спрея; HRMS: масс-спектрометрия высокого разрешения; TC: общий холестерин; LDL-C: холестерин липопротеинов низкой плотности; HDL-C: холестерин липопротеинов высокой плотности; TAG: триацилглицерин: MDA: малоносный альдегид; ALT: аланинаминотрансфераза; АСТ: аспартатаминотрансфераза; γ-GT: гамма-глутамилтрансфераза; TBARS: реакционноспособные вещества тиобарбитуровой кислоты; SD: стандартное отклонение; SPSS: статистический пакет для социальных наук; SDG: сециолаларицирсинол диглюкозид.

КМ провела экспериментальное исследование, включающее общий обзор животных, подготовку диет, отбор проб крови, эвтаназию и составление рукописи. KG и MH подготовили экстракт циклогексана и метанола и соответствующие диеты, а также провели их анализ. GA и EP выполняли и координировали все этапы патологии образцов тканей. TK и DI участвовали в удалении тканей и подготовке рукописи. AP и AC способствовали разработке исследования. Премьер-министр провел проект по производству экстрактов пистаци. NT способствовала подготовке диет и рукописи. LAS и ID задумали дизайн исследования, скоординировали эксперименты и подготовили рукопись. Все авторы прочитали и утвердили окончательную рукопись.

Методы приготовления циклогексановых и метанольных экстрактов. Подробная информация о методологии приготовления циклогексановых и метанольных экстрактов, включая 2 рисунка.

Нажмите здесь для файла

Д-р К. Марино признателен Греческому министерству развития сельских районов и продовольствия за поддержку и образовательный отпуск, а также профессору Д. Н. Перреа за ценную консультацию и поддержку в исследовании. Д-р Дантас признает Специальный счет для исследовательских грантов (№ 70/4/2591) Национального и Каподистрианского университета в Афинах за финансовую поддержку. Авторы признают биостатистика доктора А. Галаноса за экспертный статистический анализ исследования и признают экспертную помощь К. Перреа, К. Пападаки, Э. Дуси, Г. Пантелиса, П. Рапоса и З. Мертири во время экспериментов.

Первоначальный смысл понятия "атеросклероз", предложенного Маршаном в 1904 г., сводился лишь к двум типам изменений: скоплению жировых веществ в виде кашицеобразных масс во внутренней оболочке артерий (от греч. athere - каша) и собственно склерозу - соединительнотканному уплотнению стенки артерий (от греч. scleras - твердый). Современное толкование атеросклероза гораздо шире и включает в себя... "различные сочетания изменений интимы артерий, проявляющиеся в виде очагового отложения липидов, сложных соединений углеводов, элементов крови и циркулирующих в ней продуктов, образования соединительной ткани и отложения кальция" (определение ВОЗ).

Склеротически измененные сосуды (наиболее частая локализация - аорта, артерии сердца, мозга, нижних конечностей) отличаются повышенной плотностью и хрупкостью. Вследствие снижения эластических свойств они не в состоянии адекватно изменять свой просвет в зависимости от потребности органа или ткани в кровоснабжении.

Первоначально функциональная неполноценность склеротически измененных сосудов, а следовательно, органов и тканей обнаруживается только при предъявлении к ним повышенных требований, т. е. при увеличении нагрузки. Дальнейшее прогрессирование атеросклеротического процесса может привести к снижению работоспособности и в состоянии покоя.

Сильная степень атеросклеротического процесса, как правило, сопровождается сужением и даже полным закрытием просвета артерий. При медленном склерозировании артерий в органах с нарушенным кровоснабжением происходят атрофические изменения с постепенным замещением функционально активной паренхимы соединительной тканью.

Быстрое сужение или полное перекрытие просвета артерии (в случае тромбоза, тромбоэмболии или кровоизлияния в бляшку) ведет к омертвению участка органа с нарушенным кровообращением, т. е. к инфаркту. Инфаркт миокарда - наиболее часто встречающееся и наиболее грозное осложнение атеросклероза венечных артерий.

Экспериментальные модели. В 1912 г. Н. Н. Аничков и С. С. Халатов предложили способ моделирования атеросклероза у кроликов путем введения внутрь холестерина (через зонд или посредством примешивания к обычному корму). Выраженные атеросклеротические изменения развивались через несколько месяцев при ежедневном применении 0,5 - 0,1 г холестерина на 1 кг массы тела. Как правило, им сопутствовало повышение уровня холестерина в сыворотке крови (в 3 - 5 раз по сравнению с исходным уровнем), что явилось основанием для предположения о ведущей патогенетической роли в развитии атеросклероза гиперхолестеринемии . Эта модель легко воспроизводима не только у кроликов, но и у кур, голубей, обезьян, свиней.

У собак и крыс, резистентных к действию холестерина, атеросклероз воспроизводится путем комбинированного влияния холестерина и метилтиоурацила, который подавляет функцию щитовидной железы. Такое сочетание двух факторов (экзогенного и эндогенного) ведет к длительной и резкой гиперхолестеринемии (свыше 26 ммоль/л - 100 мг%). Добавление к пище сливочного масла и солей желчных кислот также способствует развитию атеросклероза.

У кур (петухов) экспериментальный атеросклероз аорты развивается после длительного (4 - 5 мес) воздействия диэтилстильбэстролом. В этом случае атеросклеротические изменения появляются на фоне эндогенной гиперхолестеринемии, возникающей вследствие нарушения гормональной регуляции обмена веществ.

Этиология. Приведенные экспериментальные примеры, а также наблюдение над спонтанным атеросклерозом человека, его эпидемиологией свидетельствуют о том, что данный патологический процесс развивается вследствие комбинированного действия ряда факторов (средовых, генетических, пищевых). В каждом отдельном случае на первый план выступает какой-нибудь один из них. Различают факторы, вызывающие атеросклероз, и факторы, способствующие его развитию.

На рис. 19.12 приведен перечень основных этиологических факторов (факторов риска) атерогенеза. Часть из них (наследственность, пол, возраст) относятся к эндогенным. Они проявляют свое действие с момента рождения (пол, наследственность) или на определенном этапе постнатального онтогенеза (возраст). Другие факторы относятся к экзогенным. С их действием организм человека сталкивается в самые различные возрастные периоды.

Роль наследственного фактора в возникновении атеросклероза подтверждают статистические данные о высокой частоте ишемической болезни сердца в отдельных семьях, а также у однояйцевых близнецов. Речь идет о наследственных формах гиперлипопротеидемии, генетических аномалиях клеточных рецепторов к липопротеидам.

Пол. В возрасте 40 - 80 лет атеросклерозом и инфарктом миокарда атеросклеротической природы мужчины болеют чаще, чем женщины (в среднем в 3 - 4 раза). После 70 лет заболеваемость атеросклерозом среди мужчин и женщин примерно одинакова. Это свидетельствует о том, что заболеваемость атеросклерозом среди женщин приходится на более поздний период. Указанные различия связаны, с одной стороны, с более низким исходным уровнем холестерина и содержанием его в основном во фракции неатерогенных а-липопротеидов сыворотки крови женщин, а с другой - с антисклеротическим действием женских половых гормонов. Снижение функции половых желез в связи с возрастом или по какой-либо другой причине (удаление яичников, их облучение) обусловливает увеличение в сыворотке крови уровня холестерина и резкое прогрессирование атеросклероза.

Предполагают, что защитное действие эстрогенов сводится не только к регуляции содержания холестерина в сыворотке крови, но и других видов обмена в артериальной стенке, в частности окислительного. Такое антисклеротическое действие эстрогенов проявляется преимущественно по отношению к венечным сосудам.

Возраст. Резкое увеличение частоты и тяжести атеросклеротического поражения сосудов в связи с возрастом, особенно заметное после 30 лет (см. рис. 19.12 ), породило у некоторых исследователей представление о том, что атеросклероз - функция возраста и является исключительно биологической проблемой [Давыдовский И. В., 1966]. Этим объясняется пессимистическое отношение к практическому решению проблемы в перспективе. Большинство исследователей, однако, придерживаются мнения, что возрастные и атеросклеротические изменения сосудов - это различные формы артериосклероза, особенно на поздних стадиях их развития, но возрастные изменения сосудов способствуют его развитию. Способствующее атеросклерозу действие возраста проявляется в виде местных структурных, физико-химических и биохимических изменений артериальной стенки и общих нарушений обмена веществ (гиперлипемия, гиперлипопротеидемия, гиперхолестеринемия) и его регуляции.

Избыточное питание. Экспериментальные исследования Н. Н. Аничкова и С. С. Халатова позволили предположить важность этиологической роли в возникновении спонтанного атеросклероза избыточного питания, в частности, избыточного поступления пищевых жиров. Опыт стран с высоким жизненным уровнем убедительно доказывает, что чем больше удовлетворяется потребность в энергии за счет животных жиров и содержащих холестерин продуктов, тем выше содержание холестерина в крови и процент заболеваемости атеросклерозом. Напротив, в странах, где на долю жиров животного происхождения приходится незначительная часть энергетической ценности суточного рациона (около 10%), заболеваемость атеросклерозом низкая (Япония, Китай).

В соответствии с разработанной в США программой, основанной на этих фактах, уменьшение потребления жиров с 40% от общего калоража до 30% к 2000 г. должно снизить смертность от инфаркта миокарда на 20 - 25%.

Стресс. Заболеваемость атеросклерозом выше среди людей "стрессовых профессий", т. е. профессий, требующих длительного и сильного нервного напряжения (врачи, учителя, преподаватели, работники управленческого аппарата, летчики и др.).

В целом заболеваемость атеросклерозом выше среди городского населения по сравнению с сельским. Это может быть объяснено тем, что в условиях большого города человек чаще подвергается нейрогенным стрессовым влияниям. Эксперименты подтверждают возможную роль нервно-психического стресса в возникновении атеросклероза. Сочетание диеты, содержащей большое количество жиров, с нервным напряжением должно рассматриваться как неблагоприятное.

Гиподинамия. Малоподвижный образ жизни, резкое уменьшение физической нагрузки (гиподинамия), свойственные человеку второй половины XX в., - еще один важный фактор атерогенеза. В пользу этого положения свидетельствуют меньшая заболеваемость атеросклерозом среди работников физического труда и большая - у лиц, занимающихся умственным трудом; более быстрая нормализация уровня холестерина в сыворотке крови после избыточного поступления его извне под действием физической нагрузки.

В эксперименте обнаружены выраженные атеросклеротические изменения в артериях кроликов после помещения их в специальные клетки, значительно уменьшающие их двигательную активность. Особенную атерогенную опасность представляет сочетание малоподвижного образа жизни и избыточного питания.

Интоксикация . Влияние алкоголя, никотина, интоксикация бактериального происхождения и интоксикация, вызванная различными химическими веществами (фториды, СO, H 2 S, свинец, бензол, соединения ртути), также являются факторами, способствующими развитию атеросклероза. В большинстве рассмотренных интоксикаций отмечались не только общие нарушения жирового обмена, свойственные атеросклерозу, но и типичные дистрофические и инфильтративно-пролиферативные изменения в артериальной стенке.

Артериальная гипертензия самостоятельного значения фактора риска, по-видимому, не имеет. Об этом свидетельствует опыт стран (Япония, Китай), население которых часто болеет гипертонической болезнью и редко - атеросклерозом. Однако повышенное артериальное давление приобретает значение способствующего развитию атеросклероза

фактора в комбинации с другими, особенно если оно превышает 160/90 мм рт. ст. Так, при одинаковом уровне холестерина заболеваемость инфарктом миокарда при гипертензии в пять раз выше, чем при нормальном артериальном давлении. В эксперименте на кроликах, в пищу которых добавляли холестерин, атеросклеротические изменения развиваются быстрее и достигают большей степени на фоне гипертензии.

Гормональные нарушения, болезни обмена веществ. В некоторых случаях атеросклероз возникает на фоне предшествующих гормональных нарушений (сахарный диабет, микседема, понижение функции половых желез) или болезней обмена веществ (подагра, ожирение, ксантоматоз, наследственные формы гиперлипопротеидемии и гиперхолестеринемии). Об этиологической роли гормональных нарушений в развитии атеросклероза свидетельствуют и приведенные выше опыты по экспериментальному воспроизведению этой патологии у животных путем влияния на эндокринные железы.

Патогенез. Существующие теории патогенеза атеросклероза можно свести к двум, принципиально отличающимся по своим ответам на вопрос: что первично, а что вторично при атеросклерозе, другими словами, что является причиной, а что следствием - липоидоз внутренней оболочки артерий или дегенеративно-пролиферативные изменения последней. Этот вопрос впервые был поставлен Р. Вирховым (1856). Он же первый и ответил на него, указав, что "при всех условиях процесс, вероятно, начинается с определенного разрыхления соединительнотканного основного вещества, из которого большей частью состоит внутренний слой артерий".

С тех пор и берет начало представление немецкой школы патологов и ее последователей в других странах, согласно которому при атеросклерозе первоначально развиваются дистрофические изменения внутренней оболочки стенки артерий, а отложение липидов и солей кальция - явление вторичного порядка. Преимуществом данной концепции является то, что она в состоянии объяснить развитие спонтанного и экспериментального атеросклероза как в тех случаях, когда имеются выраженные нарушения холестеринового обмена, так и при их отсутствии. Первостепенную роль авторы указанной концепции отводят артериальной стенке, т. е. субстрату, который непосредственно вовлекается в патологический процесс. "Атеросклероз является не только и даже не столько отражением общих обменных сдвигов (лабораторно они могут быть даже неуловимы), сколько производным собственных структурных, физических и химических превращений субстрата артериальной стенки... Первичный фактор, ведущий к атеросклерозу, лежит именно в самой артериальной стенке, в ее структуре и в ее энзимной системе" [Давыдовский И. В., 1966].

В противоположность этим взглядам со времени опытов Н. Н. Аничкова и С. С. Халатова, главным образом благодаря исследованиям отечественных и американских авторов, успешно развивается концепция о роли в развитии атеросклероза общих метаболических нарушений в организме, сопровождающихся гиперхолестеринемией, гипер- и дислипопротеидемией. С этих позиций, атеросклероз - следствие первичной диффузной инфильтрации липидов, в частности холестерина, в неизмененную внутреннюю оболочку артерий. Дальнейшие изменения в сосудистой стенке (явления мукоидного отека, дистрофические изменения волокнистых структур и клеточных элементов подэндотелиального слоя, продуктивные изменения) развиваются в связи с наличием в ней липидов, т. е. являются вторичными.

Первоначально ведущая роль в повышении уровня липидов, особенно холестерина, в крови приписывалась алиментарному фактору (избыточному питанию), что дало название и соответствующей теории возникновения атеросклероза - алиментарной . Однако очень скоро ее пришлось дополнить, так как стало очевидным, что не все случаи атеросклероза можно поставить в причинную связь с алиментарной гиперхолестеринемией. Согласно комбинационной теории Н. Н. Аничкова, в развитии атеросклероза, кроме алиментарного фактора, имеют значение эндогенные нарушения липидного обмена и его регуляции, механическое влияние на стенку сосуда, изменения артериального давления, главным образом его повышение, а также дистрофические изменения в самой артериальной стенке. В этой комбинации причин и механизмов атерогенеза одни (алиментарная и/или эндогенная гиперхолестеринемия) играют роль инициального фактора. Другие либо обеспечивают увеличенное поступление холестерина в стенку сосуда, либо уменьшают его экскрецию из нее через лимфатические сосуды.

В крови холестерин содержится в составе хиломикронов (мелкодисперсных частиц, не растворенных в плазме) и липопротеидов - надмолекулярных гетерогенных комплексов триглицеридов, эфиров холестерина (ядро), фосфолипидов, холестерина и специфических белков (апопротеиды: АПО А, В, С, Е), образующих поверхностный слой. Существуют определенные отличия липопротеидов по размерам, соотношению ядра и оболочки, качественному составу и атерогенности.

Выделены 4 основные фракции липопротеидов плазмы крови в зависимости от плотности и электрофоретической подвижности.

Обращает на себя внимание высокое содержание белка и низкое - липидов во фракции липопротеидов высокой плотности (ЛПВП - α-липопротеиды) и, наоборот, низкое содержание белка и высокое - липидов во фракциях хиломикронов, липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП - пре- β -липопротеиды) и липопротеидов низкой плотности (ЛПНП - β-липопротеиды).

Таким образом, липопротеиды плазмы крови осуществляют доставку синтезированных и полученных с пищей холестерина и триглицеридов к местам их использования и депонирования.

ЛПВП оказывают антиатерогенное действие путем обратного транспорта холестерина из клеток, в том числе из сосудов, к печени с последующим выведением из организма в форме желчных кислот. Остальные фракции липопротеидов (особенно ЛПНП) являются атерогенными, обусловливая избыточное накопление холестерина в стенке сосудов.

В табл. 5 приведена классификация первичных (генетически обусловленных) и вторичных (приобретенных) гиперлипопротеидемий с той или иной степенью выраженности атерогенного действия. Как следует из таблицы, в развитии атероматозных изменений сосудов основную роль играют ЛПНП и ЛПОНП, их повышенная концентрация в крови, избыточное поступление в интиму сосудов.

Избыточный транспорт ЛПНП и ЛПОНП в сосудистую стенку прошествует повреждению эндотелия.

В соответствии с концепцией американских исследователей И. Голдстайна и М. Брауна, ЛПНП и ЛПОНП в клетки поступают путем взаимодействия со специфическими рецепторами (АПО В, Е-реиепторы-гликопротеиды), после чего происходит их эндоцитозный захват и слияние с лизосомами. При этом ЛПНП расщепляются на белки и эфиры холестерина. Белки расщепляются на свободные аминокислоты, которые покидают клетку. Эфиры холестерина подвергаются гидролизу с образованием свободного холестерина, который поступает из лизосом в цитоплазму с последующим использованием для тех или иных целей (образование мембран, синтез стероидных гормонов и т. д.). Важно, что этот холестерин угнетает его синтез из эндогенных источников, при избытке образует "запасы" в форме эфиров холестерина и жирных кислот, но, самое главное, по механизму обратной связи угнетает синтез новых рецепторов для атерогенных липопротеидов и их дальнейшее поступление в клетку. Наряду с регулируемым рецепторопосредованным механизмом транспорта ЛП, обеспечивающим внутренние потребности клеток в холестерине, описан межэндотелиальный транспорт, а также так называемый нерегулируемый эндоцитоз, который представляет собой трансцеллюлярный, в том числе трансэндотелиальный везикулярный транспорт ЛПНП и ЛПОНП с последующим экзоцитозом (в интиму артерий из эндотелия, макрофагов, гладкомышечных клеток).

С учетом изложенных представлений механизм начального этапа атеросклероза , характеризующегося избыточным накоплением липидов в интиме артерий, может быть обусловлен:

1. Генетической аномалией рецептор-опосредованного эндоцитоза ЛПНП (отсутствие рецепторов - менее 2% от нормы, уменьшение их числа - 2 - 30% от нормы). Наличие таких дефектов обнаружено при семейной гиперхолестеринемии (гипербеталипопротеидемия II А типа) у гомо- и гетерозигот. Выведена линия кроликов (Ватанабе) с наследственным дефектом рецепторов к ЛПНП.

2. Перегрузкой рецепторопосредованного эндоцитоза при алиментарной гиперхолестеринемии. И в том, и в другом случае наступает резкое усиление нерегулируемого эндоцитозного захвата частиц ЛП эндотелиальными клетками, макрофагами и гладкомышечными клетками стенки сосудов вследствие выраженной гиперхолестеринемии.

3. Замедлением удаления атерогенных липопротеидов из стенки сосудов через лимфатическую систему в связи с гиперплазией, гипертензией, воспалительными изменениями.

Существенный дополнительный момент - различные превращения (модификации) липопротеидов в крови и сосудистой стенке. Речь идет об образовании в условиях гиперхолестеринемии аутоиммунных комплексов ЛП - IgG в крови, растворимых и нерастворимых комплексов ЛП с гликозаминогликанами, фибронектином, коллагеном и эластином в сосудистой стенке (А. Н. Климов, В. А. Нагорнев).

По сравнению с нативными ЛП захват модифицированных ЛП клетками интимы, в первую очередь макрофагами (с помощью нерегулируемых холестерином рецепторов), резко возрастает. Это, как полагают, является причиной превращения макрофагов в так называемые пенистые клетки, которые составляют морфологическую основу стадии липидных пятен и при дальнейшем прогрессировании - атером . Миграция кровяных макрофагов в интиму обеспечивается с помощью моноцитарного хемотаксического фактора, образующегося под действием ЛП и интерлейкина-1, который выделяется из самих моноцитов.

На заключительном этапе формируются фиброзные бляшки как ответ гладкомышечных клеток, фибробластов и макрофагов на повреждение, стимулируемый факторами роста тромбоцитов, эндотелиоцитов и гладкомышечных клеток, а также стадия осложненных поражений - кальцификация , тромбообразование и др. (рис. 19.13 ).

Приведенные выше концепции патогенеза атеросклероза имеют свои сильные и слабые стороны. Наиболее ценным достоинством концепции общих метаболических нарушений в организме и первичного липоидоза артериальной стенки является наличие экспериментальной холестериновой модели. Концепция первичного значения местных изменений в артериальной стенке, несмотря на то что была высказана более 100 лет назад, пока не имеет убедительной экспериментальной модели.

Как видно из изложенного, в целом они могут дополнять друг друга.

Рассмотрим особо проблему моделирования атеросклероза. Экспериментальная модель последнего показательна во многих отношениях.

Кролику, травоядному животному, вводится в желудочно-кишечный тракт в течение длительного периода огромное количество холестерина, т. е. фактически чуждого для него продукта питания. Но ведь на протяжении всей истории человечества продукты, содержащие холестерин, были нормальными ингредиентами питания. Огромное значение холестерина для многообразных функций организма отражается также в способности последнего синтезировать холестерин независимо от диеты, местом синтеза является, в частности, артериальная система, т. е. стенки артерий.

Чуждый для кролика продукт питания — холестерин — наводняет кровь и как инородное химическое тело, не имеющее в организме кролика адекватных ферментных систем, расщепляющих холестерин, или органов, способных выделить холестерин во внешнюю среду, в изобилии откладывается в ретикулоэндотелиальной системе и в артериальной системе, проходя ее эндотелиальный барьер. Такова общая судьба крупномолекулярных соединений (типа метилцеллюлозы, пектина, поливинилового алкоголя), не расщепляемых средствами организма и не выделяемых им.

Следовательно, с общетеоретических позиций, определяющих сущность всякой модели, получаемый у кроликов феномен имеет лишь внешнее сходство с артериосклерозом человека. Это сходство морфологическое, химическое, но не этиологическое (экологическое) и не патогенетическое.

Кроличья модель атеросклероза является, прежде всего, результатом неадекватного питания. Она не может, поэтому рассматриваться как модель человеческого атеросклероза и как модель обменных нарушений холестеринового обмена, хотя бы потому, что отложения чужеродных веществ не могут быть документацией нарушения обмена тех же веществ, так же как, например, отложения свинца в костях не документируют нарушений свинцового обмена.

И последнее: при атеросклерозе человека вопрос о нарушении холестеринового обмена решается скорее отрицательно.

Сказанное не исключает большого познавательного значения той же модели.

Последняя учит, что сосудистые барьеры — очень условное понятие и что через них могут свободно проходить крупномолекулярные соединения даже вне специальных дизорий, т. е. таких форм проницаемости сосудистых стенок, какие имеют место при отеках, воспалении. Модель подчеркивает также значение артериальной системы в улавливании всех циркулирующих химических соединений, вообще чуждых для организма или ставших таковыми в процессе, например, денатурации белковых тел (амилоидоз, гиалиноз).

Методологически важная сторона той же модели заключается еще в том, что в ней вскрывается опасность односторонних суждений, в данном случае основанных на чисто морфологической документации.

«Проблема причинности в медицине», И.В.Давыдовский

История экспериментального моделирования болезней поучительна во многих отношениях и прежде всего для решения принципиальных вопросов, связанных с этиологией. Она поучительна также и в плане общей методологии биологического эксперимента, его теоретических основ и практических выводов из него. Необходимо отдавать отчет в том, что всякая модель является известным упрощением, лишь более или менее наглядной копией оригинала, какой-то…

Всякий опыт является «насильственным испытанием природы» (И. Мюллер, Muller), ее законов. Сама «природа не нарушает своих законов» (Леонардо Да Винчи). Однако всякий опыт, всякое моделирование (инфекции, рака, гипертонии и т. д.) неизбежно сопряжено с каким-то нарушением законов и нередко с искажением последних, поскольку закон еще не известен экспериментатору и в основе соответствующих поисков лежат подчас…

Абсолютно решающего эксперимента, по-видимому, не существует, особенно в биологии, где так много неизвестных величин, затрудняющих постановку надежно контролируемого эксперимента. Если речь идет о теории, то эксперимент «не может полностью и окончательно подтвердить» ее потому, что «один и тот же результат может следовать из разных теорий». С наибольшей и все же с неабсолютной точностью эксперимент может…

Эксперимент должен отталкиваться от практики наблюдения и от тех теоретических построений которые эта практика порождает. Другими словами, сначала наблюдение, потом обобщающие мысли и идеи, из наблюдений вытекающие, и, наконец, моделирование. Следовательно, «необходимость эксперимента» вытекает из практического опыта, когда возникают и идеи и вопросы, как исходная точка для опыта (С. П. Боткин). Экспериментальный метод сам по…

Искусственное введение пневмококков кролику и получение у него пневмонии формально говорит о пневмококке как о причине инфекции. Однако хорошо известно, что пневмония обычно возникает спонтанно, т. е. аутоинфекционно, без какого-либо экзогенного заражения. Очевидно, что и сделанное заключение о пневмококке как причине или «главной причине» пневмонии годится только для указанной постановки опыта, т. е. для данной…

152. Основные проявления почечной недостаточности в полости рта.

158. Нарушения кальциево-фосфорного обмена. Гипо- и гиперкальциемия, их этиология и патогенез, основные проявления в полости рта.

162. Основные проявления эндокринопатий в полости рта.

172. Основные проявления нейрогенной дистрофии в полости рта.

1. Предмет и задачи патологической физиологии. Ее место в системе высшего медицинского образования. Патофизиология как теоретическая основа клинической медицины.

3.Определение понятия "болезнь". Стадии развития болезни, ее исходы.

5. Факторы, определяющие специфичность патологического процесса и избирательность лока­лизации основных структурно-функциональных нарушений.

6. Закономерности угасания и восстановления жизненных функций. Терминальные состояния: преагония, агония, клиническая смерть, их характеристика. Постреанимационная болезнь.

8. Принцип обратной связи в норме и патологии (и.П. Павлов, м.М. Завадовский, п.К. Ано­хин). Понятие о патологической системе, ее отличия от функциональной системы.

9. Взаимосвязь сомы и психики в норме и патологии. Роль охранительного торможения в пато­логии. Слово как болезнетворный и лечебный фактор. Медицинская деонтология. Понятие об ятрогении.

10. Взаимоотношения между местными и общими, специфическими и неспецифическими прояв­лениями болезни на примере патологии полости рта и челюстно-лицевой области.

11. Двойственная природа болезни. Движущая сила ее развития.

12. Понятие об адаптации и компенсации. Общая характеристика, виды адаптационных и ком­пенсаторных реакций.

13. Структурные основы и механизмы компенсаторно-приспособительных процессов. Понятие о "цене" адаптации и компенсации.

14. Общая характеристика патологических и компенсаторных реакций больного организма, при­меры, патогенетическая оценка.

16. Феномен стресса (г. Селье). Стресс-реализующие и стресс-лимитирующие системы. Адап­тивные и повреждающие эффекты стресс-реакции. Роль стресса в патологии.

Классификация реактивности

Индивидуальная групповая

18. Неспецифическая резистентность организма. Определение понятия; факторы, снижающие неспецифическую резистентность. Пути и средства повышения неспецифической резистентности организма.

19. Учение о конституции. Основные принципы классификации конституциональных типов. Роль конституции в патологии.

20. Иммунологическая реактивность. Понятие об иммунопатологических процессах. Иммуноде­фицитные состояния, их классификация и проявления.

21. Аллергия, определение понятия. Формы аллергических реакций. Характеристика основных форм аллергических реакций (немедленного и замедленного типа). Анафилактический шок.

22. Понятие об экстремальных факторах, экстремальных условиях существования и экстремаль­ных состояниях организма, общая характеристика.

23. Действие электрического тока на организм. Электротравма. Особенности электрического тока как повреждающего фактора.

24. Общие и местные проявления при поражении электрическим током. Патогенез электротрав­мы, причины смерти. Принципы оказания первой помощи.

25. Влияние повышенного и пониженного барометрического давления на организм. Высотная и кессонная болезнь. Дизбаризм.

26. Действие высокой температуры на организм. Гипертермия. Тепловой и солнечный удар, их патогенез.

27. Действие низкой температуры на организм. Гипотермия, ее патогенез.

28. Действие ионизирующего излучения на организм. Лучевые поражения. Общая характеристи­ка, классификация, патогенез.

Патогенез лучевых повреждений

29. Острая лучевая болезнь, патогенез, формы, исходы.

30. Костно-мозговая форма острой лучевой болезни, патогенез, клинические проявления, исходы.

31. Кишечная форма острой лучевой болезни, патогенез, проявления, исход.

32. Токсемическая и церебральная формы острой лучевой болезни, патогенез, проявления, исход.

34. Отдаленные последствия действия ионизирующей радиации. Понятие о стохастических и нестохастических эффектах ионизирующей радиации.

35. Шок. Определение понятия, виды, стадии, общие механизмы развития.

36. Травматический шок. Этиология, патогенез, стадии, проявления. Теории травматического шока.

37. Сущность и механизмы нарушений гемодинамики при шоке. Централизация и шунтирование кровотока, их патогенетическая оценка.

38. Коллапс, его виды, патогенез, отличия шока и комы.

39. Кома, ее виды, общие звенья патогенеза коматозных состояний.

40. Понятие о наследственных и врожденных болезнях. Классификация наследственных форм патологии. Роль наследственных и средовых факторов в развитии болезней. Фенокопии.

41. Понятие о пенетрантности и экспрессивности, роль в патологии.

42. Этиология наследственных форм патологии. Мутации, их виды. Понятие об антимутагенезе и антимутагенных факторах.

44. Хромосомные болезни. Трисомии: болезнь Дауна, Клайнфельтера, трисомия X, xyy, син­дром Патау. Трисомия 8, синдром Эдвардса. Кариотип, клинические проявления.

45. Хромосомные болезни. Моносомии и делеции: синдромы Шерешевского-Тернера, Вольфа-Хиршхорна, "кошачьего крика". Кариотип, клинические проявления.

46. Врожденные и наследственные пороки развития челюстно-лицевой облас­ти, общая характеристика.

47. Артериальная и венозная гиперемии. Определение понятий, классификация, этиология, патогенез, проявления, исходы.

49. Тромбоз. Определение понятия, этиология, патогенез тромбообразования, последствия и исходы тромбоза.

50. Эмболии, определение понятия, классификация, проявления и последствия эмболий. Виды эмболов.

51. Типовые нарушения микроциркуляции: вне-, внутрисосудистые, интрамуральные. Сладж, капилляротрофическая недостаточность. Этиология, патогенез, исходы.

52. Повреждение клетки. Этиология и наиболее общие звенья патогенеза повреждения клетки. Специфические и неспецифические проявления повреждения клетки.

53. Воспаление. Определение понятия, классификация. Компоненты воспаления, их общая харак­теристика. Воспаление как типовой патологический процесс. Местные и системные проявления воспаления.

54. Этиология воспаления. Первичная и вторичная альтерация при воспалении. Роль медиаторов воспаления в развитии вторичной альтерации.

55. Медиаторы воспаления, их происхождение, принципы классификации, основные эффекты. Эндогенные противовоспалительные факторы.

56. Физико-химические изменения в очаге воспаления, механизмы их развития, значение.

57. Сосудистые реакции, динамика нарушений периферического кровообращения в очаге воспа­ления, биологическое значение.

58. Экссудация, определение понятия. Причины и механизмы повышения проницаемости сосуди­стой стенки в очаге воспаления. Значение экссудации при воспалении. Виды экссудатов.

59. Стадии, пути и механизмы эмиграции лейкоцитов при воспалении. Основные хемоаттрактан­ты, обусловливающие миграцию лейкоцитов.

61. Стадия пролиферации, ее основные проявления и механизмы развития. Виды и исходы воспа­ления. Основные теории воспаления.

62. Связь местных и общих явлений при воспалении. Роль нервной, эндокринной и иммунной систем в развитии воспаления. Положительное и отрицательное значение воспаления для организма.

63. Воспалительные процессы в тканях челюстно-лицевой области. Особенно­сти их возникновения и течения.

64. Особенности изменений системы белой крови при воспалительных процес­сах в тканях челюстной-лицевой области.

65. Лихорадка. Определение понятия. Этиология лихорадки. Первичные пирогены, их виды. Роль первичных пирогенов в развитии лихорадки.

66. Патогенез лихорадки. Вторичные пирогены, их происхождение, центральные и системные эффекты. Стадии лихорадки. Изменение процессов терморегуляции в различные стадии лихорадки.

67. Изменение функций органов и систем при развитии лихорадки. Биологическое значение ли­хорадочной реакции. Понятие о пирогенной терапии.

68. Разновидности лихорадки.Типы температурных кривых.

69.Изменения функции слюнных желез и состояния ротовой полости при лихорадке.

70. Гипоксия. Определение понятия, классификация, патогенетическая характеристика различ­ных типов гипоксии.

71. Механизмы срочных и долговременных компенсаторно-приспособительных реакций при гипоксии. Адаптация к гипоксии, стадии развития. Принципы патогенетической терапии гипоксических состояний

72. Роль местной гипоксии в патогенезе воспалительных и дистрофических процессов в тканях челюстно-лицевой области. Применение гипербарической оксигенации в стоматологии.

73. Нарушения кислотно-основного состояния. Классификация ацидозов и алкалозов. Основные проявления ацидозов и алкалозов.

74. Механизмы компенсации нарушений кислотно-основного состояния. Лабораторные критерии нарушений и компенсации кислотно-основного состояния.

75. Локальное нарушение кислотно-основного баланса в области зубнога налета,его причины и роль в патогенезе кариеса.

76. Водный баланс. Виды нарушений водного баланса. Этиология, патогенез и проявления гипер- и дегидратаций.

77.Отек. Определения понятия. Классификация. Основные патогенетические факторы развития отека. Патогенез почечных, сердечных, кахектических, токсических отеков.

79.Этиология опухолей. Классификация бластомогенных агентов. Канцерогенные вещества экзо- и эндогенного происхождения. Методы экспериментального воспроизведения опухолей.

80.Значение наследственности, возраста, пола, особенностей питания, вредных привычек в возникновении и развитии опухолей.

81.Основные биологические особенности опухолей. Метастазирование опухолей механизмы, стадии. Понятие об опухолевой прогрессии.

82. Виды и основные проявления атипизма опухолевых клеток.

84.Виды и функции клеточных онкогенов, роль онкобелков в нарушении функции трансформированных клеток. Понятие об антионкогенах.

85. Взаимосвязь нарушений функций нервной и эндокринной систем с возникновением и развитием опухолей. Гормонально-зависимые опухоли.

86.Взаимосвязь нарушений функций иммунной системы с возникновением и ростом опухолей. Основные причины и проявления иммуносупрессии при раке.

87. Системное действие опухоли на организм. Паранеопластический синдром, его патогенез, основные проявления. Патогенез раковой кахексии.

88. Учение о предраковых состояниях. Облигатный и факультативный предрак. Стадии развития злокачественных опухолей. Основные принципы терапии и профилактики новообразований.

89. Голодание, его виды, периоды развития.

90. Гипо- и гипергликемические состояния. Этиология, патогенез, клинические проявления.

91. Гипер-, гипо-, диспротеинемии, парапротеинемии. Этиология, патогенез, клинические прояв­ления.

92. Гиперлипидемия: алиментарная, транспортная, ретенционная. Первичные и вторичные дис-липопротеинемии.

93. Изменения массы циркулирующей крови. Гипер- и гиповолемия. Этиология, патогенез, виды, клинические проявления.

95. Определение понятия «анемия». Этиопатогенетическая и морфо-функциональные классифи­кации анемий. Клинические проявления анемий.

96. Качественные и количественные изменения эритрона при анемиях. Регенеративные и дегене­ративные формы эритроцитов.

97. Этиология, патогенез, клинические проявления и картина крови при острой и хронической постгеморрагических анемиях.

98. Этиология, патогенез, клинические проявления и картина крови при железодефицитной и сидероахрестической анемиях.

100. Этиология, патогенез, клинические проявления и картина крови при наследственных гемоли­тических анемиях.

101. Основные проявления анемий и эритроцитозов в полости рта.

102. Лейкопении и лейкоцитозы. Этиология, виды, механизмы развития.

103. Агранулоцитоз, этиология, патогенез, виды, картина крови, клинические проявления. Панмиелофтиз, картина крови.

104. Основные проявления агранулоцитоза в полости рта.

105. Лейкозы. Определение понятия. Этиология и патогенез. Принципы классификации. Отличие лейкозов от лейкемоидных реакций. Картина крови, клинические проявления острых и хронических лейкозов.

106. Основные проявления острых и хронических лейкозов в полости рта.

107. Наследственные коагулопатии: гемофилии а и в. Этиология, патогенез, лабораторные и клинические проявления гемофилий.

108. Приобретенные коагулопатии: двс-синдром. Этиология, патогенез, клиническое течение, исходы.

109. Тромбоцитозы, тромбоцитопении и тромбоцитопатии. Классификация, этиология, патогенез, лабораторные и клинические проявления.

110. Наследственные и приобретенные вазопатии: болезнь Рандю-Ослера, Шенлейн-Геноха. Этиология, патогенез, клинические проявления.

111. Основные проявления нарушений коагуляционного и сосудисто-тромбоцитарного гемостаза в полости рта.???????

116. Коронарная недостаточность. Определение понятия, этиология (факторы риска), патогенез, клинические формы ибс. Некоронарогенные некрозы миокарда.

117. Основные проявления сердечно-сосудистой недостаточности в полости рта.???????????

118. Нарушение ритма сердца. Классификация аритмий. Нарушения автоматизма, экг-признаки синусовых аритмий.

I. Нарушение образования импульса

III. Комбинированные нарушения ритма

119. Нарушения возбудимости сердца. Экг-признаки экстрасистолии, пароксизмальной тахикар­дии, трепетания и мерцания предсердий и желудочков. Нарушения гемодинамики.???????????

120. Нарушение проводимости сердца. Экг-признаки атриовентрикулярной и внутрижелудочко­вых блокад.

121. Артериальные гипертензии, классификация. Симптоматические артериальные гипертензии.??????????

122. Этиология и основные теории патогенеза гипертонической болезни.

123. Клинические проявления поражения органов-мишеней при артериальной гипертензии.??????????

124. Артериальные гипотензии. Классификация. Сосудистая недостаточность кровообращения: обморок, коллапс. Их этиология и патогенез.

125. Атеросклероз, его этиология и патогенез. Роль нарушений лпнп-рецепторного взимодейст­вия в механизмах формирования атеросклеротической бляшки. Основные экспериментальные модели атеросклероза.

126. Недостаточность системы внешнего дыхания. Определение понятия, классификация. Стадии хронической дыхательной недостаточности, её клинические проявления.

127. Основные причины обструктивных и рестриктивиых нарушений лёгочной вентиляции. Изменения газового состава альвеолярного воздуха и артериальной крови при нарушении вентиляции.

128. Основные причины нарушений диффузии газов через лёгочную мембрану. Изменения газово­го состава альвеолярного воздуха и артериальной крови при нарушении диффузии.

129. Основные причины нарушения перфузии легких. Хроническая лёгочно-сердечная недоста­точность: лёгочное сердце, этиология, патогенез, клинические проявления.

130. Одышка, периодическое и терминальное дыхание. Их типы, патогенетическая характеристи­ка, механизмы развития.

131. Асфиксия. Этиология, патогенез, стадии развития.

132*. Связь нарушений внешнего дыхания и патологии челюстной-лицевой облас­ти.

133*. Нарушение пищеварения в полости рта: основные причины, механизмы развития.

134*. Нарушения жевания. Основные причины, проявления. Роль нарушения жевания в расстройствах деятельности желудочно-кишечного тракта.

136*. Нарушение функции слюнных желез. Причины и проявления гипо- и ги­персаливации.

137*. Современные представления об этиологии и патогенезе кариеса зубов.

138*. Современные представления об этиологии и патогенезе пародонтитов. Участие аутоиммунных реакций и нейрогенных дистрофий в патогенезе пародон­титов.

139*. Причины и механизмы развития нарушения глотания.

140. Основные проявления синдрома желудочной диспепсии: нарушение аппетита, тошнота, отрыжка, рвота, болевой синдром. Причины их развития.

Болевой синдром при заболеваниях жкт

141. Взаимосвязь нарушений секреторной и моторной функции желудка. Проявления гипер- и гипохлоргидрии. Патология пилорического рефлекса. Нарушение пищеварения в желудке

Расстройства секреторной функции желудка

Расстройства двигательной активности желудка

142. Язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки. Современные представления об этиологии и патогенезе язвенной болезни. Роль н. Pylori в этиологии и патогенезе заболевания.

Современные представления:

143. Нарушения моторной и секреторной деятельности кишечника и процессов всасывания. Этиология, патогенез, проявления. Нарушение пищеварения в тонкой кишке

Расстройства секреторной функции тонкой кишки

Расстройства моторной функции тонкой кишки

Расстройства всасывательной функции тонкой кишки

Расстройства функций толстой кишки

144. Кишечная аутоинтоксикация. Этиология, патогенез, проявления.

145*. Основные проявления патологии желудочно-кишечного тракта в полости рта.

146. Основные синдромы при патологии печени и желчных путей. Желтухи, виды, причины, патогенез.

147. Функциональная недостаточность печени, ее клинические проявления. Печеночная кома, основные звенья её патогенеза.

148*. Основные проявления патологии печени в полости рта.

150. Нефриты и нефротический синдром. Их этиология и патогенез, клинические проявления.

151. Острая и хроническая почечная недостаточность. Этиология, патогенез, стадии течения, клинические проявления, исходы.

При преренальной опн концентрация натрия в моче снижена в сравнении с нормой, а концентрация мочевины, креатинина и осмолярность повышена.

152*. Основные проявления почечной недостаточности в полости рта.

154. Гиперфункция аденогипофиза: гипофизарный гигантизм, акромегалия, болезнь Иценко-Кушинга, клинические проявления.

155. Патология задней доли гипофиза: проявления гипо- и гиперсекреции вазопрессина.

156. Гипер- и гипофункция щитовидной железы, основные клинические проявления.

157. Гипер- и гипофункция паращитовидных желез, основные клинические проявления.

172*. Основные проявления нейрогенной дистрофии в полости рта.

125. Атеросклероз, его этиология и патогенез. Роль нарушений лпнп-рецепторного взимодейст­вия в механизмах формирования атеросклеротической бляшки. Основные экспериментальные модели атеросклероза.

Атеросклероз - различные сочетания изменений интимы артерий, проявляющиеся в виде очагового отложения липидов, сложных сое­динений углеводов, элементов крови и циркулирующих в ней продук­тов, образования соединительной ткани и отложения кальция.

Экспериментальные модели

В 1912 г. Н. Н. Аничков и С. С. Ха­латов предложили способ моделирования атеросклероза у кроликов путем введения внутрь холестерина (через зонд или посредством при­мешивания к обычному корму). Выраженные атеросклеротические из­менения развиваются через несколько месяцев при ежедневном при­менении 0,5 - 0,1 г холестерина на 1 кг массы тела. Как правило, им сопутствует повышение уровня холестерина в сыворотке крови (в 3 - 5 раз по сравнению с исходным уровнем), что явилось основанием для предположения о ведущей патогенетической роли в развитии атеро­склероза гиперхолестеринемии. Эта модель легко воспроизводима не только у кроликов, но и у кур, голубей, обезьян, свиней.

У собак и крыс, резистентных к действию холестерина, атероскле­роз воспроизводится путем комбинированного влияния холестерина и метилтиоурацила, который подавляет функцию щитовидной же­лезы. Такое сочетание двух факторов (экзогенного и эндогенного) ведет к длительной и резкой гиперхолестеринемии (свыше 26ммоль/л-1000 мг %). До­бавление к пище сливочного масла и солей желчных кислот также способствует развитию атеросклероза.

У кур (петухов) экспери­ментальный атеросклероз аор­ты развивается после дли­тельного воздействия диэтилстильбестролом. В этом слу­чае атеросклеротические из­менения появляются на фонеэндогенной гиперхолестери­немии, возникающей вслед­ствие нарушения гормональ­ной регуляции обмена веществ.

Этиологические ф-ры :

эндогенные

1. наследственность

   пол (в возрасте 40 - 80 лет атеросклерозом и инфарктом миокарда атеросклеротической природы мужчины болеют чаще, чем женщины (в среднем в 3 - 4 раза). После 70 лет заболеваемость атеросклерозом среди мужчин и женщин примерно одинакова.)

   возраст (> 30 лет)

2. экзогенные

избыточное питание (много пищевых жиров и содержащих холестен продуктов)

1. гиподинамия

   интоксикации (алкоголь, никотин, химические в-ва)

   артериальная гипертензия (АД > 160/90)

   гормональные нарушения, болезни обмена в-в (сахарный диабет, микседема, ↓ функции половых желез, подагра, ожирение, гиперхолистеринемии)

Патогенез :

Существующие теории патогенеза атеросклероза можно свести к двум, принципиально отличающимся по своим отве­там на вопрос: что первично, а что вторично при атеросклерозе, дру­гими словами, что является причиной, а что следствием - липоидоз внутренней оболочки артерий или дегенеративно-пролиферативные изменения последней. Этот вопрос впервые был поставлен Р. Вир-ховым (1856). Он же первый и ответил на него, указав, что «при всех условиях процесс, вероятно, начинается с определенного разрыхле­ния соединительно-тканного основного вещества, из которого боль­шей частью состоит внутренний слой артерий».

С тех пор и берет свое начало представление немецкой школы па­тологов и ее последователей в других странах, согласно которому при атеросклерозе первоначально развиваются дистрофические из­менения внутренней оболочки стенки артерий, а отложение липидов и солей кальция - явление вторичного порядка. Преимуществом данной концепции является то, что она в состоянии объяснить разви­тие спонтанного и экспериментального атеросклероза как в тех слу­чаях, когда имеются нарушения холестеринового обмена, так и в тех (что особенно важно), когда их нет. Первостепенную роль авторы указанной концепции отводят артериальной стенке, т. е. субстрату, который непосредственно вовлекается в патологический процесс. «Атеросклероз является не только и даже не столько отражением общих обменных сдвигов (лабораторно они могут быть даже неуло­вимы), сколько производным собственных структурных, физических и химических превращений субстрата артериальной стенки... Пер­вичный фактор, ведущий к атеросклерозу, лежит именно в самой ар­териальной стенке, в ее структуре и в ее энзимной системе» (И. В. Да­выдовский, 1966).

В противоположность этим взглядам со времени опытов Н. Н. Аничкова и С. С. Халатова, главным образом благодаря исследованиям советских и американских авторов, успешно развива­ется концепция о роли в развитии атеросклероза общих метаболиче­ских нарушений в организме, сопровождающихся гиперхолестеринемией, гиперлипемией и гипербеталипопротеидемией. С этих пози­ций, ятердсуклррпя атеросклероз - следствие первичной диффузной инфильтрации липидов, в частности холестерина, в неизмененную внутреннюю обо­лочку артерий. Дальнейшие изменения в сосудистой стенке (явле­ния мукоидного отека, дистрофические изменения волокнистых структур и клеточных элементов подэндотелиального слоя, продук­тивные изменения) развиваются в связи с наличием в ней липидов, т. е. являются вторичными.

Первоначально ведущая роль в повышении уровня липидов, осо­бенно холестерина, в крови приписывалась алиментарному фактору (избыточному питанию), что дало название и соответствующей теории возникновения атеросклероза - алиментарной. Однако очень скоро ее пришлось дополнить, так как стало очевидным, что не все случаи атеросклероза можно поставить в причинную связь с алиментар­ной гиперхолестеринемией. Согласно комбинационной теории Н. Н. Аничкова, в развитии атеросклероза, кроме алиментарного фактора, имеют значение эндогенные нарушения липидного обмена и его регуляции, механическое влияние на стенку сосуда, изменения артериального давления, главным образом его повышение, а также дистрофические изменения в самой артериальной стенке. Однако и в этой модификации прежняя формула «без холестерина нет атеро­склероза» сохранила свой первоначальный смысл. Это обусловлено тем, что развитие атеросклероза связано в первую очередь с уровнем холестерина в сыворотке крови.

В последующие годы было показано, что для возникновения ате­росклероза имеет значение не только увеличение содержания холе­стерина в сыворотке крови, но и изменение соотношения между уров­нями холестерина и фосфолипидов (в норме 0,9). При атеросклерозе это соотношение увеличивается. Фосфолипиды снижают содержание холестерина в сыворотке крови, удерживают его в эмульгированном состоянии, препятствуют отложению в стенке сосудов. Таким обра­зом, их относительный дефицит, является одним из важных способ­ствующих факторов атерогенеза.

Не менее важную роль играет качественный состав поступающего в организм жира. Обычно 2 / 3 вводимого в организм холестерина всту­пает в химическую (эфирную) связь с жирными кислотами (главным образом в печени) с образованием холестеринэстеров. Этерификация холестерина ненасыщенными жирными кислотами (линолевой, линоленовой, арахидоновой), содержащимися в растительных маслах и рыбьем жире, способствует образованию полярных лабильных, лег­корастворимых и катаболизируемых эфиров холестерина. Напротив, этерификация холестерина насыщенными жирными кислотами, глав­ным образом животного происхождения (стеариновой, пальмитино­вой), способствует появлению труднорастворимых, легко выпадаю­щих из раствора холестеринэстеров. Кроме того, известна способность ненасыщенных жирных кислот уменьшать уровень холестерина в сыворотке крови путем ускорения его экскреции и метаболических превращений, а насыщенных- увеличивать его. Приведенные факты Позволяют заключить, что уменьшение соотношения ненасыщенных и насыщенных жирных кислот способствует развитию атеросклероза. Липиды сыворотки крови (холестерин, эфиры холестерина, фосфолипиды, триглицериды) отчасти состоят из хиломикронов (мелко­дисперсных частиц, нерастворенных в плазме) и липопротеидов - растворенных в плазме комплексов α- и β-глобулинов и липидов. α-Липопротеиды приблизительно на 33-60 % состоят из белков и на 40-67 % - из жиров, (β-липопротеиды - примерно на 7-21 % и на 79-93 % соответственно.

При атеросклерозе увеличено содержание β-липопротеидов, в пер­вую очередь с низкой удельной массой (0,99-1,023). Эти липопротеиды флотируют со скоростью 10-20 Sf, отличаются повышенным содержанием холестерина и насыщенных жирных кислот, относитель­ным дефицитом фосфолипидов, легко выпадают в осадок. Более пол­ная физическая и патофизиологическая характеристика, а также классификация типов атерогенных липопротеидов и соответствую­щих гиперлипопротеидемий проведена Фредриксоном и соавторами (1967).

Очевидно, что вид «транспорта», который обеспечивает доставку холестерина в сосудистую стенку при атеросклерозе, имеет сущест­венное значение как в механизме возникновения атеросклеротических поражений, определяя их характер и степень выраженности, так и для дифференцированной диетической и лекарственной терапии.

Кроме того, учитывая способность атерогенных β -липопротеидов после их проникновения в сосудистую стенку комплексироваться с кислыми гликозаминогликанами и гликопротеидами, приобретая антигенные свойства, допускается возможность выработки аутоантител и развитие патологического процесса по типу аутоиммунного. Этому может способствовать также появление аутоантигенов из про­дуктов распада атеросклеротических бляшек, обеспечивающих спе­цифическую сенсибилизацию организма.

В последние годы большое внимание уделяется изучению плаз­менных и тканевых ферментов, расщепляющих липиды. Установле­но, что липолитическая активность у животных, резистентных к али­ментарному холестериновому атерослерозу (крысы, собаки), повышена и, напротив, у восприимчивых к этому заболеванию животных (кро­лики, куры, голуби) - понижена.

У человека в связи с возрастом, а также при атеросклерозе липо­литическая активность стенки аорты снижается. Это дает возмож­ность предположить, что в сложной системе механизмов, способству­ющих развитию липоидоза сосудов при атеросклерозе, определен­ную роль играет недостаточность липолитических ферментов.

Большое значение в патогенезе атеросклероза имеют процессы биосинтеза холестерина. Последний в организме животных образу­ется через стадию активного ацетата (ацетил-КоА) из белков, жи­ров и углеводов. Печень является главным органом, синтезирующим холестерин в организме. Стенка сосудов также не лишена способности синтезировать холестерин из ацетата. В ней могут образовываться и фосфолипиды, и некоторые жирные кислоты. Однако сосудистая стенка не в состоянии обеспечить образование того количества липидов, которое обнаруживается в ней при атеросклерозе. Основным ис­точником их является сыворотка крови. Следовательно, развитие атеросклероза без избыточного поступления холестерина извне можно объяснить эндогенной гиперхолестеринемией, гиперлипемией и гипербеталипопротеидемией.

Приведенные выше концепции патогенеза атеросклероза имеют свои сильные и слабые стороны. Наиболее ценным достоинством кон­цепции общих метаболических нарушений в организме и первичного липоидоза артериальной стенки является наличие экспериментальной холестериновой модели. Концепция первичного значения мест­ных изменений в артериальной стенке, несмотря на то, что была вы­сказана 100 лет назад, пока не имеет убедительной экспериментальной модели.

"